Detecting protein-protein interactions based on kinase-mediated growth induction of mammalian cells.
Detecting protein-protein interactions based on kinase-mediated growth induction of mammalian cells.
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DOI：
10.1038/srep06127
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发表时间：
2014-08-19
影响因子：
4.6
通讯作者：
Kawahara M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mabe S;Nagamune T;Kawahara M
蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的检测对于理解哺乳动物细胞中的许多过程是重要的;然而，现有的PPI检测方法通常给出显著的背景信号。在这里，我们提出了一种新的PPI检测方法的基础上激酶介导的哺乳动物细胞的生长诱导。在该方法中，靶蛋白与c-kit的胞内结构域（c-kit ICD）融合并在白介素-3依赖性哺乳动物细胞中表达。PPI诱导c-kit ICD的二聚化和活化，这导致在不存在白细胞介素-3的情况下细胞生长。使用该系统，我们成功地检测了FKBPF 36 V的配体依赖性同源相互作用和FKBP与FRBT 2098 L的异源相互作用，以及MDM 2与已知肽抑制剂之间的组成型相互作用。有趣的是，表达高亲和力肽嵌合体的细胞选自主要表达低亲和力肽嵌合体的细胞群的混合物。这些结果表明，该方法可以检测低背景水平的PPI，适用于肽抑制剂筛选。
Detection of protein–protein interactions (PPIs) is important for understanding numerous processes in mammalian cells; however, existing PPI detection methods often give significant background signals. Here, we propose a novel PPI-detection method based on kinase-mediated growth induction of mammalian cells. In this method, target proteins are fused to the intracellular domain of c-kit (c-kit ICD) and expressed in interleukin-3-dependent mammalian cells. The PPI induces dimerization and activation of c-kit ICDs, which leads to cell growth in the absence of interleukin-3. Using this system, we successfully detected the ligand-dependent homo-interaction of FKBPF36V and hetero-interaction of FKBP and FRBT2098L, as well as the constitutive interaction between MDM2 and a known peptide inhibitor. Intriguingly, cells expressing high-affinity peptide chimeras are selected from the mixture of the cell populations dominantly expressing low-affinity peptide chimeras. These results indicate that this method can detect PPIs with low background levels and is suitable for peptide inhibitor screening.
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影响因子：
9.2
作者：
Liang J;Wu YL;Chen BJ;Zhang W;Tanaka Y;Sugiyama H
通讯作者：
Sugiyama H
DOI：
10.1007/978-1-61737-967-3_15
发表时间：
2011-01-01
期刊：
HETEROLOGOUS GENE EXPRESSION IN E COLI: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Kanno, Akira;Ozawa, Takeaki;Umezawa, Yoshio
通讯作者：
Umezawa, Yoshio
影响因子：
48
作者：
Gruenberg, Raik;Burnier, Julia V.;Serrano, Luis
通讯作者：
Serrano, Luis
影响因子：
8
作者：
Chattopadhyay, A;Tate, SA;Ferrigno, PK
通讯作者：
Ferrigno, PK
影响因子：
5.3
作者：
Hong, L;Munugalavadla, V;Kapur, R
通讯作者：
Kapur, R