Single-locus targeting constructs for reliable regulated RNAi and transgene expression in Trypanosoma brucei.
Single-locus targeting constructs for reliable regulated RNAi and transgene expression in Trypanosoma brucei.
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DOI：
10.1016/j.molbiopara.2008.05.006
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发表时间：
2008-09
影响因子：
1.5
通讯作者：
Horn, David
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Alsford, Sam;Horn, David
重组转录本可重复性表达的一个主要障碍是整合后侧翼染色质的表观遗传效应。我们之前提出了一种在布鲁氏锥虫血液中克服这一问题的策略，使用报告程序识别支持最佳表达的核糖体-间隔区基因座，然后标记该基因座以用于后续的靶向。优点包括消除了变量表达式的位置效应，并且易于确认正确的积分。我们现在报告一组利用该系统表达dsRNA或重组蛋白的有效构建体。目前的构建集允许表达分子内双链RNA以用于RNA干扰敲除或表达可结合c-Myc表位的蛋白质(S)或用于亚细胞定位、相互作用和/或其他功能分析的荧光标记。这些构建物整合在一个标记的位置上，并提供可靠和可重复性的表达。
A major obstacle to reproducible expression of recombinant transcripts lies in the epigenetic effects of the flanking chromatin following integration. We previously presented a strategy to overcome this problem in bloodstream form Trypanosoma brucei, using a reporter to identify a ribosomal-spacer locus that supports optimal expression and then marking that locus for subsequent targeting. Advantages include elimination of variable-expression position-effects and the easy confirmation of correct integration. We now report a set of validated constructs that exploit this system for expression of dsRNA or recombinant protein. The current construct-set allows expression of intramolecular dsRNA for RNA interference knockdown or expression of proteins that can incorporate c-Myc epitope(s) or a fluorescent-tag for subcellular localisation, interaction and/or other functional analysis. The constructs are integrated at a single, marked locus and deliver reliable and reproducible expression.
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影响因子：
1.5
作者：
Durand-Dubief, M;Kohl, L;Bastin, P
通讯作者：
Bastin, P
影响因子：
1.5
作者：
Oberholzer, M;Morand, S;Seebeck, T
通讯作者：
Seebeck, T
影响因子：
1.5
作者：
Kelly, Steven;Reed, Jenny;Kramer, Susanne;Ellis, Louise;Webb, Helena;Sunter, Jack;Salje, Jeanne;Marinsek, Nina;Gull, Keith;Wickstead, Bill;Carrington, Mark
通讯作者：
Carrington, Mark
影响因子：
56.9
作者：
WIRTZ, E;CLAYTON, C
通讯作者：
CLAYTON, C
使用基于 PCR 的一步式策略对布氏锥虫基因进行体内表位标记
影响因子：
1.5
作者：
Shen, SY;Arhin, GK;Tschudi, C
通讯作者：
Tschudi, C