Amplification-free detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas13a and mobile phone microscopy.
Amplification-free detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas13a and mobile phone microscopy.
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DOI：
10.1016/j.cell.2020.12.001
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发表时间：
2021-01-21
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Ott M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fozouni P;Son S;Díaz de León Derby M;Knott GJ;Gray CN;D'Ambrosio MV;Zhao C;Switz NA;Kumar GR;Stephens SI;Boehm D;Tsou CL;Shu J;Bhuiya A;Armstrong M;Harris AR;Chen PY;Osterloh JM;Meyer-Franke A;Joehnk B;Walcott K;Sil A;Langelier C;Pollard KS;Crawford ED;Puschnik AS;Phelps M;Kistler A;DeRisi JL;Doudna JA;Fletcher DA;Ott M
2019年12月爆发的新型呼吸道病毒SARS-CoV-2已成为一种持续的全球大流行，部分原因是识别该病毒的有症状、无症状和无症状的携带者面临挑战。如果CRISPR诊断能够快速、便携和准确地进行，那么它可以增强基于PCR的黄金标准检测。在这里，我们报告了一种无需扩增的CRISPR-Cas13a方法，用于直接从可以用手机显微镜读取的鼻拭子RNA中检测SARS-CoV-2。该方法在不到30分钟的测量时间内达到了∼100拷贝/μL的灵敏度，并在不到5分钟的时间内准确地从一组阳性的临床样本中检测到了预提取的RNA.我们结合针对SARS-CoV-2RNA的crRNA来提高敏感性和特异性，并使用酶动力学直接量化病毒载量。与基于移动电话的读取器设备相结合，这种检测方法有可能实现对SARS-CoV-2的快速、低成本、医疗保健点筛查。Fozouni等人。设计一种使用CRISPR-Cas13a从患者样本中检测和量化SARS-CoV-2RNA的方法，而不需要预扩增步骤。然后，他们展示了如何使用基于移动电话的便携式设备高效地检测化验信号。
The December 2019 outbreak of a novel respiratory virus, SARS-CoV-2, has become an ongoing global pandemic due in part to the challenge of identifying symptomatic, asymptomatic, and pre-symptomatic carriers of the virus. CRISPR diagnostics can augment gold-standard PCR-based testing if they can be made rapid, portable, and accurate. Here, we report the development of an amplification-free CRISPR-Cas13a assay for direct detection of SARS-CoV-2 from nasal swab RNA that can be read with a mobile phone microscope. The assay achieved ∼100 copies/μL sensitivity in under 30 min of measurement time and accurately detected pre-extracted RNA from a set of positive clinical samples in under 5 min. We combined crRNAs targeting SARS-CoV-2 RNA to improve sensitivity and specificity and directly quantified viral load using enzyme kinetics. Integrated with a reader device based on a mobile phone, this assay has the potential to enable rapid, low-cost, point-of-care screening for SARS-CoV-2. Fozouni et al. devise a way to use CRISPR-Cas13a to detect and quantify SARS-CoV-2 RNA from patient samples without the need for a pre-amplification step. They then show how the assay’s signal can be efficiently detected with a portable, mobile phone-based device.
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CRISPR-C2C2的两种不同的RNase活性启用了指导RNA处理和RNA检测。
影响因子：
64.8
作者：
East-Seletsky A;O'Connell MR;Knight SC;Burstein D;Cate JH;Tjian R;Doudna JA
通讯作者：
Doudna JA
DOI：
10.1126/science.aaf5573
发表时间：
2016-08-05
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Konermann S;Joung J;Slaymaker IM;Cox DB;Shmakov S;Makarova KS;Semenova E;Minakhin L;Severinov K;Regev A;Lander ES;Koonin EV;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
影响因子：
12.6
作者：
Angus SV;Cho S;Harshman DK;Song JY;Yoon JY
通讯作者：
Yoon JY
影响因子：
6.7
作者：
Hou, Tieying;Zeng, Weiqi;Xu, Teng
通讯作者：
Xu, Teng
影响因子：
64.8
作者：
Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Essletzbichler P;Han S;Joung J;Belanto JJ;Verdine V;Cox DBT;Kellner MJ;Regev A;Lander ES;Voytas DF;Ting AY;Zhang F
通讯作者：
Zhang F