Dimerization Determines Substrate Specificity of a Bacterial Prenyltransferase
Dimerization Determines Substrate Specificity of a Bacterial Prenyltransferase
复制标题
二聚化决定细菌异戊二烯基转移酶的底物特异性
DOI：
10.1002/cbic.201200127
复制
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
Babinger
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Peterhoff;Zellner;Guldan;Sterner;Babinger
我们已经确定了天然的二聚体界面heptaprenylglyceryl phosphate synthase PcrB从bacteriumBacillus subtilisand分析的意义，寡聚体形成的稳定性和催化活性。计算方法预测两个不同的表面区域的PcrB原聚体，可能是负责二聚体的形成。通过引入导致单体化的氨基酸取代以及通过掺入非天然氨基酸以允许两个原聚体交联，在计算机模拟和实验上评估了这些真实的界面。结果表明，与以前的假设相反，PcrB使用相同的接口作为同源的香叶基香叶基甘油磷酸合成酶的二聚体，从PcrB。热解折叠表明，单体蛋白质的稳定性仅略低于野生型PcrB。然而，活性测定表明，单体化限制了接受的聚异戊二烯焦磷酸的长度为三个异戊二烯单元，而天然的PcrB底物含有七个异戊二烯实体。我们提供了一个合理的假设，二聚化决定底物特异性的PcrB。
We have identified the native dimer interface of heptaprenylglyceryl phosphate synthase PcrB from the bacteriumBacillus subtilisand analyzed the significance of oligomer formation for stability and catalytic activity. Computational methods predicted two different surface regions of the PcrB protomer that could be responsible for dimer formation. These bona fide interfaces were assessed both in silico and experimentally by the introduction of amino acid substitutions that led to monomerization, and by incorporation of an unnatural amino acid to allow cross‐linking of the two protomers. The results showed that, in contrast to previous assumptions, PcrB uses the same interface for dimerization as the homologous geranylgeranylglyceryl phosphate synthase from Archaea. Thermal unfolding demonstrated that the monomeric proteins are only slightly less stable than wild‐type PcrB. However, activity assays showed that monomerization limits the length of accepted polyprenyl pyrophosphates to three isoprene units, whereas the native PcrB substrate contains seven isoprene entities. We provide a plausible hypothesis as to how dimerization determines substrate specificity of PcrB.
登录
查看更多内容
影响因子：
15
作者：
Doud EH;Perlstein DL;Wolpert M;Cane DE;Walker S
通讯作者：
Walker S
Rosetta3：一个面向对象的软件套件，用于大分子的仿真和设计。
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
16.6
作者：
Guldan, Harald;Matysik, Frank-Michael;Babinger, Patrick
通讯作者：
Babinger, Patrick
影响因子：
2.9
作者：
Badger, J;Sauder, JM;Harris, TJR
通讯作者：
Harris, TJR
影响因子：
3.5
作者：
HO, SN;HUNT, HD;PEASE, LR
通讯作者：
PEASE, LR