Direct and dynamic detection of HIV-1 in living cells.
Direct and dynamic detection of HIV-1 in living cells.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0050026
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Leonhardt H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Helma J;Schmidthals K;Lux V;Nüske S;Scholz AM;Kräusslich HG;Rothbauer U;Leonhardt H
在基础和应用HIV研究中，可靠检测病毒成分对于监测感染进展至关重要。虽然在体外检测结构病毒蛋白用于诊断目的是常规的，但在没有病毒基因修饰的情况下，以前仍然不可能直接和动态地观察活细胞中的HIV。在这里，我们描述了一种新的荧光生物传感器，动态跟踪HIV-1在活细胞中的形态发生。我们产生了骆驼科动物的单域抗体，特异性结合HIV-1衣壳蛋白（CA）在亚纳摩尔的亲和力，并融合到荧光蛋白。由此产生的荧光色体特异性地识别活细胞中的CA携带的HIV-1 Gag前体蛋白，并且适用于各种先进的光学显微镜系统。共聚焦活细胞显微镜和超分辨率显微镜允许检测和动态跟踪单个病毒体组装在质膜上。亚细胞结合动力学分析表明，细胞质抗原识别和纳入到病毒粒子组装位点。最后，我们展示了这种新的报告在自动图像分析中的使用，为基于细胞的HIV研究提供了一个强大的工具。
In basic and applied HIV research, reliable detection of viral components is crucial to monitor progression of infection. While it is routine to detect structural viral proteins in vitro for diagnostic purposes, it previously remained impossible to directly and dynamically visualize HIV in living cells without genetic modification of the virus. Here, we describe a novel fluorescent biosensor to dynamically trace HIV-1 morphogenesis in living cells. We generated a camelid single domain antibody that specifically binds the HIV-1 capsid protein (CA) at subnanomolar affinity and fused it to fluorescent proteins. The resulting fluorescent chromobody specifically recognizes the CA-harbouring HIV-1 Gag precursor protein in living cells and is applicable in various advanced light microscopy systems. Confocal live cell microscopy and super-resolution microscopy allowed detection and dynamic tracing of individual virion assemblies at the plasma membrane. The analysis of subcellular binding kinetics showed cytoplasmic antigen recognition and incorporation into virion assembly sites. Finally, we demonstrate the use of this new reporter in automated image analysis, providing a robust tool for cell-based HIV research.
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影响因子：
6.7
作者：
Ivanchenko S;Godinez WJ;Lampe M;Kräusslich HG;Eils R;Rohr K;Bräuchle C;Müller B;Lamb DC
通讯作者：
Lamb DC
影响因子：
56.9
作者：
Schermelleh, Lothar;Carlton, Peter M.;Sedat, John W.
通讯作者：
Sedat, John W.
影响因子：
48
作者：
Rothbauer, Ulrich;Zolghadr, Kourosh;Leonhardt, Heinrich
通讯作者：
Leonhardt, Heinrich
影响因子：
64.8
作者：
Bharat, Tanmay A. M.;Davey, Norman E.;Briggs, John A. G.
通讯作者：
Briggs, John A. G.
影响因子：
5.4
作者：
Müller, B;Daecke, J;Kräusslich, HG
通讯作者：
Kräusslich, HG