Isolation of ubiquitinated substrates by tandem affinity purification of E3 ligase-polyubiquitin-binding domain fusions (ligase traps).
Isolation of ubiquitinated substrates by tandem affinity purification of E3 ligase-polyubiquitin-binding domain fusions (ligase traps).
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通过将E3连接酶 - 聚氨酯结合结构域融合（连接酶陷阱）的串联纯度纯化（连接酶陷阱）分离出泛素化的底物。
DOI：
10.1038/nprot.2016.008
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发表时间：
2016-02
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
Toczyski DP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mark KG;Loveless TB;Toczyski DP
泛素化是一种重要的蛋白质修饰，它影响真核生物从底物降解到非蛋白降解途径的改变，包括DNA修复和内吞作用。以前尝试通过亲和纯化的方法来分析底物，在这种方法中，泛素连接酶融合到一个多泛素结合域，从而可以分离泛素。通过使用该方法，可以分离特定连接酶特定的泛素化底物以用于质谱学或蛋白质印迹分析。收集完细胞后，所描述的方案可以在2-3天内完成。
Ubiquitination is an essential protein modification that influences eukaryotic processes ranging from substrate degradation to nonproteolytic pathway alterations, including DNA repair and endocytosis. Previous attempts to analyze substrates via affinity purification approach in which ubiquitin ligases are fused to a polyubiquitin-binding domain, which allows the isolation ubiquitin. By using this protocol, ubiquitinated substrates that are specific for a given ligase can be isolated for mass spectrometry or western blot analysis. After cells have been collected, the described protocol can be completed in 2–3 d.
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