Purification of Recombinant ESCRT-III Proteins and Their Use in Atomic Force Microscopy and In Vitro Binding and Phosphorylation Assays.
Purification of Recombinant ESCRT-III Proteins and Their Use in Atomic Force Microscopy and In Vitro Binding and Phosphorylation Assays.
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重组 ESCRT-III 蛋白的纯化及其在原子力显微镜以及体外结合和磷酸化测定中的应用。
DOI：
10.1007/978-1-4939-9492-2_15
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Capalbo L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Capalbo L
已知转运所需的内体分选复合物（ESCRT）-III蛋白组装成丝，所述丝在各种生物过程中介导膜重塑和分裂，包括内体多泡体的形成、病毒出芽、胞质分裂、质膜修复、核孔质量控制、核膜重组和神经元修剪。因此，ESCRT-III蛋白的调节和功能的研究对于理解这些事件至关重要，需要结合体内和体外实验技术。在这里，我们描述了两个协议的纯化人类和果蝇ESCRT-III蛋白从细菌和他们的使用在体外磷酸化测定和原子力显微镜实验膜脂双层。这些方案也可应用于在细菌中表达时不溶的其他蛋白质的纯化。
The endosomal sorting complex required for transport (ESCRT)-III proteins are known to assemble into filaments that mediate membrane remodeling and fission in various biological processes, including the formation of endosomal multivesicular bodies, viral budding, cytokinesis, plasma membrane repair, nuclear pore quality control, nuclear envelope reformation, and neuron pruning. The study of the regulation and function of ESCRT-III proteins is therefore crucial to understand these events and requires a combination of in vivo and in vitro experimental techniques. Here we describe two protocols for the purification of human andDrosophilaESCRT-III proteins from bacteria and their use in in vitro phosphorylation assays and atomic force microscopy experiments on membrane lipid bilayers. These protocols can also be applied for the purification of other proteins that are insoluble when expressed in bacteria.
影响因子：
56.9
作者：
Guizetti, Julien;Schermelleh, Lothar;Gerlich, Daniel W.
通讯作者：
Gerlich, Daniel W.
胞质分裂过程中染色体过客复合物和中枢纺锤体对 ESCRT-III 成分 CHMP4C 的协调调节
DOI：
10.17863/cam.6710
发表时间：
2016
期刊：
--
影响因子：
--
作者：
Capalbo L
通讯作者：
Capalbo L
影响因子：
5.6
作者：
Bhutta MS;McInerny CJ;Gould GW
通讯作者：
Gould GW