Probing local environments of tryptophan residues in proteins: Comparison of 19F nuclear magnetic resonance results with the intrinsic fluorescence of soluble human tissue factor
Probing local environments of tryptophan residues in proteins: Comparison of 19F nuclear magnetic resonance results with the intrinsic fluorescence of soluble human tissue factor
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探测蛋白质中色氨酸残基的局部环境：19F核磁共振结果与可溶性人体组织因子固有荧光的比较
DOI：
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发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
J. Ross
中科院分区：
文献类型：
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作者：
J. Zemsky;E. Rusinova;Y. Nemerson;L. Luck;J. Ross
5 -氟色氨酸（5F - Trp）的19F核磁共振（19F NMR）和色氨酸（Trp）荧光都提供了当地环境和色氨酸残留物溶剂暴露的信息。为了比较这些光谱提供的信息，将重组可溶性人组织因子（sTF）中的4个Trp残基替换为5F‐Trp。5F - Trp残基（14,25,45和158）的19F NMR定位是基于野生型蛋白谱与三个单Trp - to - Phe替代突变体谱的比较。之前，我们从突变型sTF与野生型sTF的荧光和吸收差异光谱中发现，Trp14和Trp25的侧链被埋没，而Trp45和Trp158的侧链部分暴露在散装溶剂中（Hasselbacher等人，Biophys J1995; 69:20-29）。19F NMR顺磁展宽和溶剂诱导同位素位移实验表明，5F - Trp158的吲哚环的第5位是暴露的，而5F - Trp45的吲哚环基本上是不可接近的。尽管5F -色氨酸的掺入对野生型或突变型蛋白的促凝辅助因子活性没有明显的影响，但19F NMR化学位移表明，单色氨酸突变伴随着5F -色氨酸残基驻留在同一结构域的局部环境的微妙变化。蛋白质1999;37:709 - 716。©1999 Wiley‐Liss, Inc。
19F nuclear magnetic resonance (19F NMR) of 5‐fluorotryptophan (5F‐Trp) and tryptophan (Trp) fluorescence both provide information about local environment and solvent exposure of Trp residues. To compare the information provided by these spectroscopies, the four Trp residues in recombinant soluble human tissue factor (sTF) were replaced with 5F‐Trp. 19F NMR assignments for the 5F‐Trp residues (14, 25, 45, and 158) were based on comparison of the wild‐type protein spectrum with the spectra of three single Trp‐to‐Phe replacement mutants. Previously we showed from fluorescence and absorption difference spectra of mutant versus wild‐type sTF that the side chains of Trp14 and Trp25 are buried, whereas those of Trp45 and Trp158 are partially exposed to bulk solvent (Hasselbacher et al., Biophys J1995;69:20–29). 19F NMR paramagnetic broadening and solvent‐induced isotope‐shift experiments show that position 5 of the indole ring of 5F‐Trp158 is exposed, whereas that of 5F‐Trp45 is essentially inaccessible. Although 5F‐Trp incorporation had no discernable effect on the procoagulant cofactor activity of either the wild‐type or mutant proteins, 19F NMR chemical shifts showed that the single‐Trp mutations are accompanied by subtle changes in the local environments of 5F‐Trp residues residing in the same structural domain. Proteins 1999;37:709–716. ©1999 Wiley‐Liss, Inc.
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