Highly sensitive and specific Alu-based quantification of human cells among rodent cells.
Highly sensitive and specific Alu-based quantification of human cells among rodent cells.
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DOI：
10.1038/s41598-017-13402-3
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发表时间：
2017-10-16
影响因子：
4.6
通讯作者：
Akashi H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Funakoshi K;Bagheri M;Zhou M;Suzuki R;Abe H;Akashi H
Alu元件是灵长类特有的短穿插元件（short interspersed element, sin），在人类基因组中存在超过100万份拷贝；因此，Alu元素是检测人体细胞的有用靶标。然而，先前基于alu的人类基因组DNA检测技术在灵敏度和特异性上都没有达到理论极限。在这项研究中，我们开发了一种高度敏感和特异性的基于alu的实时PCR方法，用于区分人类细胞和啮齿动物细胞，使用精心设计的引物和探针集，以避免可能与啮齿动物基因组发生交叉反应。从100 ng的人类和啮齿动物混合基因组中，可检测到1 fg的人类基因组，相当于1亿个啮齿动物细胞中的1个人类细胞。此外，体内小鼠肾下包膜异种移植实验显示，每个小鼠器官可检测到10个人类细胞。此外，经尾静脉向NOD/SCID小鼠静脉注射人间充质干细胞后，人类细胞在小鼠肺和肾脏的生物分布可被追踪至少1周。我们的研究结果表明，我们的引物和探针集适用于定量检测微量的人类细胞，如异种移植的人类癌症或干细胞，在啮齿动物。
Alu elements are primate-specific short interspersed elements (SINEs), over 1 million copies of which are present in the human genome; thus, Alu elements are useful targets for detecting human cells. However, previous Alu-based techniques for detecting human genomic DNA do not reach the theoretical limits of sensitivity and specificity. In this study, we developed a highly sensitive and specific Alu-based real-time PCR method for discriminating human cells from rodent cells, using a primer and probe set carefully designed to avoid possible cross-reactions with rodent genomes. From 100 ng of mixed human and rodent genomes, 1 fg of human genome, equivalent to 1 human cell in 100 million rodent cells, was detectable. Furthermore, in vivo mouse subrenal capsule xenotransplantation assays revealed that 10 human cells per mouse organ were detectable. In addition, after intravenous injection of human mesenchymal stem cells into NOD/SCID mice via tail vein, the biodistribution of human cells was trackable in the mouse lungs and kidneys for at least 1 week. Our findings indicate that our primer and probe set is applicable for the quantitative detection of tiny amounts of human cells, such as xenotransplanted human cancer or stem cells, in rodents.
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影响因子：
5.8
作者：
Larkin, M. A.;Blackshields, G.;Higgins, D. G.
通讯作者：
Higgins, D. G.
DOI：
10.1073/pnas.86.17.6686
发表时间：
1989-09-01
影响因子：
11.1
作者：
NELSON, DL;LEDBETTER, SA;CASKEY, CT
通讯作者：
CASKEY, CT
DOI：
10.1016/s1050-3862(98)00019-9
发表时间：
1999-02-01
期刊：
GENETIC ANALYSIS-BIOMOLECULAR ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
Livak, KJ
通讯作者：
Livak, KJ
影响因子：
5.6
作者：
DEININGER, PL;JOLLY, DJ;SCHMID, CW
通讯作者：
SCHMID, CW
静脉注射HMSC改善了小鼠的心肌梗塞，因为栓塞在肺中的细胞被激活以分泌抗炎蛋白TSG-6。
影响因子：
23.9
作者：
Lee RH;Pulin AA;Seo MJ;Kota DJ;Ylostalo J;Larson BL;Semprun-Prieto L;Delafontaine P;Prockop DJ
通讯作者：
Prockop DJ