Yeast surface display platform for rapid discovery of conformationally selective nanobodies.
Yeast surface display platform for rapid discovery of conformationally selective nanobodies.
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DOI：
10.1038/s41594-018-0028-6
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发表时间：
2018-03
影响因子：
16.8
通讯作者：
Kruse AC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McMahon C;Baier AS;Pascolutti R;Wegrecki M;Zheng S;Ong JX;Erlandson SC;Hilger D;Rasmussen SGF;Ring AM;Manglik A;Kruse AC
骆驼单域抗体片段（“纳米体”）提供了单个15 kDa免疫球蛋白VHH结构域内抗体的显著特异性。这种独特的特性使应用范围从生化工具到治疗剂。纳米体已经成为蛋白质结构生物学中特别有用的工具，促进了构象动态蛋白质（如G蛋白偶联受体（gpcr））的研究。迄今为止，几乎所有可用的纳米体都是通过动物免疫获得的，这是限制该技术许多应用的瓶颈。为了解决这个问题，我们报道了一个基于酵母表面显示的纳米体发现的全体外平台。我们提供了鉴定纳米体的蓝图，通过将纳米体与其抗原结晶，展示了该文库的实用性，最重要的是，我们利用该平台发现了两种不同的人类gpcr的构象选择性纳米体。为了促进该平台的广泛部署，库和相关协议可免费用于非营利性研究。
Camelid single-domain antibody fragments (“nanobodies”) provide the remarkable specificity of antibodies within a single 15 kDa immunoglobulin VHH domain. This unique feature has enabled applications ranging from use as biochemical tools to therapeutic agents. Nanobodies have emerged as especially useful tools in protein structural biology, facilitating studies of conformationally dynamic proteins such as G protein-coupled receptors (GPCRs). Nearly all nanobodies available to date have been obtained by animal immunization, a bottleneck restricting many applications of this technology. To solve this problem, we report a fully in vitro platform for nanobody discovery based on yeast surface display. We provide a blueprint for identifying nanobodies, demonstrate the utility of the library by crystallizing a nanobody with its antigen, and most importantly, we utilize the platform to discover conformationally-selective nanobodies to two distinct human GPCRs. To facilitate broad deployment of this platform, the library and associated protocols are freely available for non-profit research.
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影响因子：
64.5
作者：
Manglik A;Kim TH;Masureel M;Altenbach C;Yang Z;Hilger D;Lerch MT;Kobilka TS;Thian FS;Hubbell WL;Prosser RS;Kobilka BK
通讯作者：
Kobilka BK
蛋白质动力学在GPCR功能中的作用：β2AR和视紫红质的见解。
影响因子：
7.5
作者：
Manglik, Aashish;Kobilka, Brian
通讯作者：
Kobilka, Brian
DOI：
10.1073/pnas.0812952106
发表时间：
2009-03-03
影响因子：
11.1
作者：
Gao, Junjun;Sidhu, Sachdev S.;Wells, James A.
通讯作者：
Wells, James A.
影响因子：
64.8
作者：
Hino, Tomoya;Arakawa, Takatoshi;Iwanari, Hiroko;Yurugi-Kobayashi, Takami;Ikeda-Suno, Chiyo;Nakada-Nakura, Yoshiko;Kusano-Arai, Osamu;Weyand, Simone;Shimamura, Tatsuro;Nomura, Norimichi;Cameron, Alexander D.;Kobayashi, Takuya;Hamakubo, Takao;Iwata, So;Murata, Takeshi
通讯作者：
Murata, Takeshi
DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K