Accessing protein methyltransferase and demethylase enzymology using microfluidic capillary electrophoresis.
Accessing protein methyltransferase and demethylase enzymology using microfluidic capillary electrophoresis.
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DOI：
10.1016/j.chembiol.2010.04.014
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发表时间：
2010-07-30
影响因子：
--
通讯作者：
Janzen WP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wigle TJ;Provencher LM;Norris JL;Jin J;Brown PJ;Frye SV;Janzen WP
针对bbbb80酶的小分子的发现，可以从赖氨酸和精氨酸残基中添加（甲基转移酶）或去除（去甲基化酶）甲基标记，尤其是存在于组蛋白尾部，可能产生前所未有的化疗药物并促进再生医学。为了更好地对这些蛋白质进行化学探索，我们开发了一种新型的、高定量的微流体毛细管电泳分析方法，以实现对这些酶及其抑制动力学的全面机制研究。该技术根据电荷质量比分离小生物分子，即肽。然而，甲基化并不改变肽底物的电荷。为了克服这一限制，我们采用了一种甲基化敏感的内源性蛋白酶策略来分离甲基化和非甲基化肽。该实验在赖氨酸甲基转移酶（G9a）和赖氨酸去甲基化酶（LSD1）上进行了验证，并用于研究小分子对G9a的抑制作用。
The discovery of small molecules targeting the > 80 enzymes that add (methyltransferases) or remove (demethylases) methyl marks from lysine and arginine residues, most notably present in histone tails, may yield unprecedented chemotherapeutic agents and facilitate regenerative medicine. To better enable chemical exploration of these proteins, we have developed a novel and highly quantitative microfluidic capillary electrophoresis assay to enable full mechanistic studies of these enzymes and the kinetics of their inhibition. This technology separates small biomolecules, i.e., peptides, based on their charge-to-mass ratio. Methylation, however, does not alter the charge of peptide substrates. To overcome this limitation, we have employed a methylation-sensitive endoproteinase strategy to separate methylated from unmethylated peptides. The assay was validated on a lysine methyltransferase (G9a) and a lysine demethylase (LSD1) and was employed to investigate the inhibition of G9a by small molecules.
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DOI：
10.1016/0006-291x(79)92154-5
发表时间：
1979-01-01
影响因子：
3.1
作者：
FRIEDMAN, S
通讯作者：
FRIEDMAN, S