Linear nicking endonuclease-mediated strand-displacement DNA amplification.
Linear nicking endonuclease-mediated strand-displacement DNA amplification.
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DOI：
10.1016/j.ab.2011.02.025
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发表时间：
2011-07-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Huang X
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Joneja A;Huang X
我们描述了一种使用切口核酸内切酶介导的DNA聚合酶链置换进行线性等温DNA扩增的方法。核酸内切酶对DNA靶的一条链的切口产生用于聚合酶的引物以启动合成。随着聚合的进行，下游链被置换成单链形式，同时切口位点也被再生。通过内切核酸酶的切口和通过聚合酶的链置换合成的组合的连续重复作用导致DNA分子的一条链的线性扩增。我们证明，高达五千个核苷酸的DNA模板可以线性扩增使用的切口核酸内切酶与7个碱基对识别序列和测序酶版本2.0的单链DNA结合蛋白的存在下。我们还表明，500，1000，和5000核苷酸长度的三个模板的混合物被线性扩增与保留的模板的原始摩尔比。此外，我们证明了一个复杂的库的水动力剪切的基因组DNA从噬菌体λ可以线性扩增。
We describe a method for linear isothermal DNA amplification using nicking endonuclease-mediated strand displacement by a DNA polymerase. The nicking of one strand of a DNA target by the endonuclease produces a primer for the polymerase to initiate synthesis. As the polymerization proceeds, the downstream strand is displaced into a single-stranded form while the nicking site is also regenerated. The combined continuous repetitive action of nicking by the endonuclease and strand displacement synthesis by the polymerase results in linear amplification of one strand of the DNA molecule. We demonstrate that DNA templates up to five thousand nucleotides can be linearly amplified using a nicking endonuclease with seven base-pair recognition sequence and Sequenase version 2.0 in the presence of single-stranded DNA binding proteins. We also show that a mixture of three templates of 500, 1000, and 5000 nucleotides in length are linearly amplified with the original molar ratios of the templates preserved. Moreover, we demonstrate that a complex library of hydrodynamically sheared genomic DNA from bacteriophage lambda can be amplified linearly.
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影响因子：
2.7
作者：
Joneja A;Huang X
通讯作者：
Huang X
影响因子：
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作者：
Eklund JL;Ulge UY;Eastberg J;Monnat RJ Jr
通讯作者：
Monnat RJ Jr
影响因子：
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作者：
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Danielsen M
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作者：
Lasken, Roger S;Stockwell, Timothy B
通讯作者：
Stockwell, Timothy B
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作者：
Lasken, Roger S.
通讯作者：
Lasken, Roger S.