Efficient CRISPR/Cas9 genome editing in a salmonid fish cell line using a lentivirus delivery system
Efficient CRISPR/Cas9 genome editing in a salmonid fish cell line using a lentivirus delivery system
复制标题
使用慢病毒传递系统对鲑鱼细胞系进行高效 CRISPR/Cas9 基因组编辑
DOI：
10.1101/734442
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Gratacap R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gratacap R
1摘要基因组编辑正在改变生物科学研究，但它在非模式生物中的应用，如养殖动物物种，需要优化。按价值计算，鲑鱼是最重要的水产养殖物种，提高对传染病的遗传抵抗力是主要目标。然而，利用基因组编辑来评估细胞系中可能的抗病基因，以及全基因组CRISPR筛查的使用目前受到现有工具和技术的限制。在目前的研究中，开发了一种使用慢病毒转导的优化方案，以有效地将构建体整合到Chinook鲑鱼(Oncorhynchus Tshway Tcha)细胞系(CHSE-214)的基因组中。作为原理验证，在EGFP-Cas9稳定的CHSE细胞系中高效地编辑了两个目的基因；具体地说，是外源的整合的EGFP和内源的Rig-I位点。最后，展示了抗生素选择的有效使用，以丰富成功编辑的目标人群。这里报道的优化的慢病毒介导的CRISPR方法增加了在鲑鱼细胞中进行有效的基因组编辑的可能性，特别是在未来全基因组CRISPR抗病筛查的应用中。
1AbstractGenome editing is transforming bioscience research, but its application to non-model organisms, such as farmed animal species, requires optimisation. Salmonids are the most important aquaculture species by value, and improving genetic resistance to infectious disease is a major goal. However, use of genome editing to evaluate putative disease resistance genes in cell lines, and the use of genome-wide CRISPR screens is currently limited by a lack of available tools and techniques. In the current study, an optimised protocol using lentivirus transduction for efficient integration of constructs into the genome of a Chinook salmon (Oncorhynchus tshwaytcha) cell line (CHSE-214) was developed. As proof-of-principle, two target genes were edited with high efficiency in an EGFP-Cas9 stable CHSE cell line; specifically, the exogenous, integrated EGFP and the endogenous RIG-I locus. Finally, the effective use of antibiotic selection to enrich the successfully edited targeted population was demonstrated. The optimised lentiviral-mediated CRISPR method reported here increases possibilities for efficient genome editing in salmonid cells, in particular for future applications of genome-wide CRISPR screens for disease resistance.
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