Simple method for large-scale production of macrophage activating factor GcMAF.
Simple method for large-scale production of macrophage activating factor GcMAF.
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DOI：
10.1038/s41598-020-75571-y
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发表时间：
2020-11-05
影响因子：
4.6
通讯作者：
Nabeshima YI
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nabeshima Y;Abe C;Kawauchi T;Hiroi T;Uto Y;Nabeshima YI
人群体特异性成分蛋白（Gc蛋白）是一种多功能血清蛋白，在人体内具有Gc1F、Gc1S和Gc2三种常见的等位基因变体。Gc1在苏氨酸420 （Thr420）残基上含有一个o连接的三糖[唾液酸-半乳糖- n -乙酰半乳糖（GalNAc）]，通过选择性去除唾液酸和半乳糖，使GalNAc在Thr420处转化为有效的巨噬细胞激活因子（GcMAF）。相反，Gc2没有糖基化。GcMAF被认为是癌症免疫治疗和抗血管生成治疗的有希望的候选者，并引起了极大的兴趣，但由于制备GcMAF的方法不同，因此很难在研究小组之间比较研究结果。在这里，我们提出了一种简单实用的方法，通过在ExpiCHO-S细胞无血清悬浮培养中过表达gc蛋白来制备高质量的GcMAF，而不需要去糖基化步骤。我们认为该方案适合大规模生产GcMAF进行功能分析和临床试验。
Human group-specific component protein (Gc protein) is a multifunctional serum protein which has three common allelic variants, Gc1F, Gc1S and Gc2 in humans. Gc1 contains an O-linked trisaccharide [sialic acid-galactose-N-acetylgalactosamine (GalNAc)] on the threonine420 (Thr420) residue and can be converted to a potent macrophage activating factor (GcMAF) by selective removal of sialic acid and galactose, leaving GalNAc at Thr420. In contrast, Gc2 is not glycosylated. GcMAF is considered a promising candidate for immunotherapy and antiangiogenic therapy of cancers and has attracted great interest, but it remains difficult to compare findings among research groups because different procedures have been used to prepare GcMAF. Here, we present a simple, practical method to prepare high-quality GcMAF by overexpressing Gc-protein in a serum-free suspension culture of ExpiCHO-S cells, without the need for a de-glycosylation step. We believe this protocol is suitable for large-scale production of GcMAF for functional analysis and clinical testing.
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影响因子：
4.8
作者：
Kanda Y
通讯作者：
Kanda Y
DOI：
10.1046/j.1525-1373.1999.d01-3.x
发表时间：
1999-01-01
影响因子：
--
作者：
Koga, Y;Naraparaju, VR;Yamamoto, N
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Fannon, Michael
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McVoy, LA;Kew, RR
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Kew, RR