Genetic and biochemical analyses of chromosome and plasmid gene homologues encoding ICL and ArCP domains in Vibrio anguillarum strain 775.
Genetic and biochemical analyses of chromosome and plasmid gene homologues encoding ICL and ArCP domains in Vibrio anguillarum strain 775.
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DOI：
10.1007/s10534-011-9416-7
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发表时间：
2011-08
期刊：
影响因子：
3.5
通讯作者：
Crosa, Jorge H.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Di Lorenzo, Manuela;Stork, Michiel;Crosa, Jorge H.
关键词：
安吉菌素是由鳗弧菌775产生的铁载体，由2，3-二羟基苯甲酸（DHBA）、半胱氨酸和羟组胺通过非核糖体肽合成酶（NRPS）机制合成。大多数编码anguibactin生物合成蛋白的基因由pJM 1质粒携带。在这项工作中，我们报告的质粒编码的angB菌株775的染色体上的同源物的鉴定。这两种基因的产物都含有一个异分支酸裂解酶（ICL）结构域，该结构域将异氯酸转化为2，3-二氢-2，3-二羟基苯甲酸，这是DHBA合成的步骤之一。我们在这项工作中表明，这两个ICL结构域在鳗弧菌和大肠杆菌中的DHBA生产中具有功能。杆菌用丙氨酸取代两个ICL结构域的活性位点中的天冬氨酸残基完全废除了它们在体内的异分支酸裂解酶活性。这两种蛋白质还携带芳基载体蛋白（ArCP）结构域。与ICL结构域相反，只有质粒编码的ArCP可以参与anguibactin的生产，如通过互补分析和质粒编码的蛋白质S248 A的活性位点中的定点诱变所确定的。还在体外测试了定点突变体，即编码AngB的质粒的ICL结构域中的D37 A和ArCP结构域中的S248 A，并且清楚地显示了每个残基对于结构域功能的重要性，并且每个结构域独立地操作。
Anguibactin, the siderophore produced by Vibrioanguillarum 775 is synthesized from 2,3-dihydroxybenzoic acid (DHBA), cysteine and hydroxyhistamine via a nonribosomal peptide synthetase (NRPS) mechanism. Most of the genes encoding anguibactin biosynthetic proteins are harbored by the pJM1 plasmid. In this work we report the identification of a homologue of the plasmid-encoded angB on the chromosome of strain 775. The product of both genes harbor an isochorismate lyase (ICL) domain that converts isochorismic acid to 2,3-dihydro-2,3-dihydroxybenzoic acid, one of the steps of DHBA synthesis. We show in this work that both ICL domains are functional in the production of DHBA in V. anguillarum as well as in E. coli. Substitution by alanine of the aspartic acid residue in the active site of both ICL domains completely abolishes their isochorismate lyase activity in vivo. The two proteins also carry an aryl carrier protein (ArCP) domain. In contrast with the ICL domains only the plasmid encoded ArCP can participate in anguibactin production as determined by complementation analyses and site-directed mutagenesis in the active site of the plasmid encoded protein, S248A. The site-directed mutants, D37A in the ICL domain and S248A in the ArCP domain of the plasmid encoded AngB were also tested in vitro and clearly show the importance of each residue for the domain function and that each domain operates independently.
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影响因子：
2.9
作者：
Parsons, JF;Calabrese, K;Ladner, JE
通讯作者：
Ladner, JE
DOI：
10.1073/pnas.120163297
发表时间：
2000-06-06
影响因子：
11.1
作者：
Datsenko, KA;Wanner, BL
通讯作者：
Wanner, BL
影响因子：
3.1
作者：
CROSA, JH;HODGES, LL;SCHIEWE, MH
通讯作者：
SCHIEWE, MH
影响因子：
3.5
作者：
BOLIVAR, F
通讯作者：
BOLIVAR, F
DOI：
10.1073/pnas.76.4.1648
发表时间：
1979-01-01
影响因子：
11.1
作者：
FIGURSKI, DH;HELINSKI, DR
通讯作者：
HELINSKI, DR