Ratiometric Raman spectroscopy for quantification of protein oxidative damage.
Ratiometric Raman spectroscopy for quantification of protein oxidative damage.
复制标题
比例分析拉曼光谱法，用于定量蛋白质氧化损伤。
DOI：
10.1016/j.ab.2009.05.019
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发表时间：
2009-08-15
影响因子：
2.9
通讯作者：
Sygula A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang D;Jiang D;Yanney M;Zou S;Sygula A
建立了一种新的比例拉曼光谱（RMRS）定量测定蛋白质羰基水平的方法。以氧化牛血清白蛋白（BSA）和氧化溶菌酶为模型蛋白进行实验。该技术包括将蛋白质羰基与二硝基苯肼（DNPH）偶联，然后进行滴涂沉积拉曼光谱采集（DCDR）。RMRS方法易于实现，因为它只需要一次共轭反应，一次光谱采集，并且不需要样品校准。在单光谱采集中获得蛋白质和DNPH部分的特征峰，允许从峰强度比计算蛋白质羰基水平。RMRS方法的检测灵敏度为~0.33 pmol羰基/次。基于荧光和/或免疫分析的技术只能检测来自标记分子的信号，因此无法获得修饰蛋白的结构或定量信息，而RMRS技术在单个实验中提供蛋白质鉴定和蛋白质羰基定量。
A novel ratiometric Raman spectroscopic (RMRS) method has been developed for quantitative determination of protein carbonyl levels. Oxidized bovine serum albumin (BSA) and oxidized lysozyme were used as model proteins to demonstrate this method. The technique involves conjugation of protein carbonyls with dinitrophenyl hydrazine (DNPH), followed by drop coating deposition Raman spectral acquisition (DCDR). The RMRS method is easy to implement as it requires only one conjugation reaction, a single spectral acquisition, and does not require sample calibration. Characteristic peaks from both protein and DNPH moieties are obtained in a single spectral acquisition, allowing the protein carbonyl level to be calculated from the peak intensity ratio. Detection sensitivity for the RMRS method is ~0.33 pmol carbonyl/measurement. Fluorescence and/or immunoassay based techniques only detect a signal from the labeling molecule and thus yield no structural or quantitative information for the modified protein while the RMRS technique provides for protein identification and protein carbonyl quantification in a single experiment.
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