Selective monitoring of insulin secretion after CRISPR interference in intact pancreatic islets despite submaximal infection.
Selective monitoring of insulin secretion after CRISPR interference in intact pancreatic islets despite submaximal infection.
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DOI：
10.1080/19382014.2020.1752072
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发表时间：
2020-05-03
期刊：
影响因子：
2.2
通讯作者：
Ku G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shariati K;Pappalardo Z;Chopra DG;Yiv N;Sheen R;Ku G
病毒介导的基因敲低在完整的胰岛是技术上的挑战，由于缺乏感染的胰岛中心。因为没有基因敲低的细胞有正常的胰岛素分泌，测量基因敲低后胰岛素分泌的变化是具有挑战性的。我们描述了一种方法，仅监测β细胞的胰岛素分泌，在完整的胰岛中敲低感兴趣的基因，使用单个慢病毒包含一个向导RNA，一个荧光素酶胰岛素分泌报告基因和一个dCas9-KRAB磁带。这种方法可以快速和廉价地监测胰岛素分泌，仅从那些被敲低的β细胞，避免了不完全胰岛感染的问题。
Virus-mediated gene knockdown in intact pancreatic islets is technically challenging due to poor infection of the center of the islet. Because the cells that do not have knockdown have normal insulin secretion, measuring changes in insulin secretion after gene knockdown is challenging. We describe a method to monitor insulin secretion from only the beta cells with knockdown of a gene of interest in intact islets using a single lentivirus containing a guide RNA, a luciferase insulin secretion reporter and a dCas9-KRAB cassette. This method allows rapid and inexpensive monitoring of insulin secretion from only those beta cells with knockdown, circumventing the problem of incomplete islet infection.
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影响因子：
8.1
作者：
Santos LRB;Muller C;de Souza AH;Takahashi HK;Spégel P;Sweet IR;Chae H;Mulder H;Jonas JC
通讯作者：
Jonas JC
影响因子：
29
作者：
Burns, Sean M.;Vetere, Amedeo;Altshuler, David
通讯作者：
Altshuler, David
DOI：
10.3791/255
发表时间：
2007-01-01
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Szot, Gregory L;Koudria, Pavel;Bluestone, Jeffrey A
通讯作者：
Bluestone, Jeffrey A
影响因子：
5.4
作者：
Dull, T;Zufferey, R;Naldini, L
通讯作者：
Naldini, L
影响因子：
7.7
作者：
Cirulli, V;Zalatan, J;Crisa, L
通讯作者：
Crisa, L