Aptamers as detection molecules on reverse phase protein microarrays for the analysis of cell lysates
Aptamers as detection molecules on reverse phase protein microarrays for the analysis of cell lysates
复制标题
适体作为反相蛋白微阵列上的检测分子，用于分析细胞裂解物
DOI：
10.1002/elsc.201100100
复制
发表时间：
2012
影响因子：
2.7
通讯作者：
Thomas Scheper
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Miriam Lübbecke;Johanna-Gabriela Walter;Frank Stahl;Thomas Scheper
本研究提出并讨论了Cy3标记的适体（其中Cy3是吲哚碳菁）针对his标签（其中his是组氨酸）的应用，用于在所谓的反相试验中检测微阵列上的his标签蛋白质。这些类型的检测是蛋白质微阵列技术中广泛使用的工具。迄今为止，抗体通常被用作检测分子。本文研究了两种不同的滴注技术，接触滴注和非接触滴注，以及不同类型的载玻片，醛改性玻璃载玻片和硝化纤维素膜涂覆载玻片，并进行了比较。通过这项研究，我们验证了微阵列高蛋白质结合能力的重要性，以及荧光团在适体中的标记位置。纯化的他‐标记的PFEI（假单胞菌荧光酯酶I）被用作模型系统。可检测到低至30 nM的PFEI - his浓度。这些结果证明了适体作为稳定检测分子在蛋白质分析中的适用性。此外，发现反相法适用于细胞裂解物中PFEI‐his的检测。这可能对蛋白质生产和纯化过程的监测有进一步的兴趣。
This study presents and discusses the application of Cy3‐labeled aptamers (where Cy3 is indocarbocyanine) directed against the his‐tag (where his is histidine) for the detection of his‐tagged proteins on microarrays in a so‐called reverse phase assay. These types of assays are widely used tools in protein microarray technology. Up to now antibodies are usually applied as detection molecules. Here, two different spotting techniques, contact and noncontact spotting, as well as different types of slides, aldehyde‐modified glass slides and nitrocellulose membrane coated slides, were examined and compared. Through this study, we validated the importance of a high protein‐binding capacity of the microarray, and the labeling position of the fluorophore within the aptamer. Purified his‐tagged PFEI (Pseudomonas fluorescenceesterase I) was used as a model system. Concentrations of PFEI‐his as low as 30 nM were detectable. These results demonstrate the applicability of aptamers as stable detection molecules in protein assays. Additionally, the reverse phase assay was found to be suitable for the detection of PFEI‐his in cell lysates. This might be of further interest in monitoring of protein production and purification processes.
登录
查看更多内容
创新的模块化膜吸附器系统，用于蛋白质纯化的高通量下游筛选
DOI：
--
发表时间：
2006
期刊：
Biotechnology progress (Print)
影响因子：
--
作者：
Öznur Kökpinar;D. Harkensee;C. Kasper;T. Scheper;R. Zeidler;O. Reif;R. Ulber
通讯作者：
R. Ulber
在改性硝酸纤维素膜上针对 hINF-gamma 的微阵列夹心 ELISA 的优化。
DOI：
--
发表时间：
2007
期刊：
Biotechnology progress (Print)
影响因子：
--
作者：
M. Reck;F. Stahl;J. Walter;M. Hollas;D. Melzner;T. Scheper
通讯作者：
T. Scheper
影响因子：
2.9
作者：
Hamaguchi, N;Ellington, A;Stanton, M
通讯作者：
Stanton, M
影响因子：
4.8
作者：
Collett, JR;Cho, EJ;Ellington, AD
通讯作者：
Ellington, AD
用于制造蛋白质芯片的单层硝化纤维基材
影响因子：
8.4
作者：
L. Yin;Chih;Cheng
通讯作者：
Cheng