Reproducible automated phosphopeptide enrichment using magnetic TiO2 and Ti-IMAC.
Reproducible automated phosphopeptide enrichment using magnetic TiO2 and Ti-IMAC.
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DOI：
10.1021/ac5025842
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发表时间：
2014-10-21
影响因子：
7.4
通讯作者：
Jorgensen, Claus
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tape, Christopher J.;Worboys, Jonathan D.;Sinclair, John;Gourlay, Robert;Vogt, Janis;McMahon, Kelly M.;Trost, Matthias;Lauffenburger, Douglas A.;Lamont, Douglas J.;Jorgensen, Claus
可重复的、全面的磷酸肽富集是研究磷酸化调控过程的必要条件。在这里，我们描述了超多孔磁性TiO2和Ti-IMAC微球在均匀自动磷酸肽富集中的应用。将磁性微球与磁性颗粒处理机器人相结合，可在96孔中实现快速（45分钟）、可重复性（r2≥0.80）和高保真（>90%纯度）的磷酸肽纯化。自动磷酸肽富集显示合成磷酸肽的可重复性超过2个数量级，“孔到孔”的定量重现性与内部SILAC标准没有区别，并且在5天的独立富集中具有强大的“板到板”重现性。因此，自动磷酸肽富集能够以高通量的方式对无标记的磷酸蛋白质组学样品进行统计分析。该技术使用市售的现成组件，可以很容易地被任何对磷蛋白质组学分析感兴趣的实验室采用。我们提供免费下载的自动磷酸肽富集程序，以促进统一的实验室间合作和交换磷酸蛋白质组学数据集。
Reproducible, comprehensive phosphopeptide enrichment is essential for studying phosphorylation-regulated processes. Here, we describe the application of hyper-porous magnetic TiO2 and Ti-IMAC microspheres for uniform automated phosphopeptide enrichment. Combining magnetic microspheres with a magnetic particle-handling robot enables rapid (45 min), reproducible (r2 ≥ 0.80) and high-fidelity (>90% purity) phosphopeptide purification in a 96-well format. Automated phosphopeptide enrichment demonstrates reproducible synthetic phosphopeptide recovery across 2 orders of magnitude, “well-to-well” quantitative reproducibility indistinguishable to internal SILAC standards, and robust “plate-to-plate” reproducibility across 5 days of independent enrichments. As a result, automated phosphopeptide enrichment enables statistical analysis of label-free phosphoproteomic samples in a high-throughput manner. This technique uses commercially available, off-the-shelf components and can be easily adopted by any laboratory interested in phosphoproteomic analysis. We provide a free downloadable automated phosphopeptide enrichment program to facilitate uniform interlaboratory collaboration and exchange of phosphoproteomic data sets.
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影响因子：
1.6
作者：
Kuroda, I;Shintani, Y;Furuno, M
通讯作者：
Furuno, M
影响因子：
4.4
作者：
Prakash A;Rezai T;Krastins B;Sarracino D;Athanas M;Russo P;Zhang H;Tian Y;Li Y;Kulasingam V;Drabovich A;Smith CR;Batruch I;Oran PE;Fredolini C;Luchini A;Liotta L;Petricoin E;Diamandis EP;Chan DW;Nelson R;Lopez MF
通讯作者：
Lopez MF
DOI：
10.1074/mcp.o113.034181
发表时间：
2013-12
期刊：
Molecular & cellular proteomics : MCP
影响因子：
--
作者：
Olsen JV;Mann M
通讯作者：
Mann M
影响因子：
7.4
作者：
Alpert, Andrew J.
通讯作者：
Alpert, Andrew J.
影响因子：
7
作者：
Larsen, MR;Thingholm, TE;Jorgensen, TJD
通讯作者：
Jorgensen, TJD