Unveiling the Substrate Specificity of Meprin β on the Basis of the Site in Protein Kinase A Cleaved by the Kinase Splitting Membranal Proteinase*
Unveiling the Substrate Specificity of Meprin β on the Basis of the Site in Protein Kinase A Cleaved by the Kinase Splitting Membranal Proteinase*
复制标题
基于蛋白激酶 A 中被激酶分裂膜蛋白酶切割的位点揭示 Meprin β 的底物特异性*
DOI：
--
复制
发表时间：
1997
影响因子：
4.8
通讯作者：
S. Shaltiel
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. Chestukhin;Larisa Litovchick;K. Muradov;Misha Batkin;S. Shaltiel
激酶分裂膜蛋白酶 (KSMP) 是一种金属内肽酶，可通过剪掉蛋白激酶 A (PKA) 的羧基末端尾部来灭活其催化 (C) 亚基。在这里，我们表明这种切割发生在激酶的酸性氨基酸簇 (Asp328-Glu334) 内的 Glu332-Glu333 处。 C 亚基的 KSMP 和 meprin β（重现 KSMP 活性）的 Km 值低于 1 μM。含有四个 Glu 残基的肽的 Km 在微摩尔范围内，说明该簇对 meprin β 的底物识别的显着贡献。这一结论得到了使用一系列酸性簇中存在缺失和突变的 C 亚基突变体的系统研究的支持。裂解位点附近的疏水性氨基酸会增加蛋白酶的 Kcat。这些研究揭示了 meprin β 的新特异性，表明新底物的 Km 和 Kcat 比常用于 meprin 测定的底物好 1-2 个数量级。对具有此类酸性和疏水性簇的底物的研究表明，胃泌素是一个潜在的靶标，这些底物在生理条件下可与美普林接触。事实上，meprin β 可在其五个谷氨酸残基簇以及其 WMDF-NH2 序列内的 M-D 键处裂解胃泌素，这对于胃泌素的所有已知生物活性都是不可或缺的。后者的 meprin 裂解将导致胃泌素失活，从而控制其活性。
The kinase splitting membranal proteinase (KSMP) is a metalloendopeptidase that inactivates the catalytic (C) subunit of protein kinase A (PKA) by clipping off its carboxyl terminal tail. Here we show that this cleavage occurs at Glu332-Glu333, within the cluster of acidic amino acids (Asp328-Glu334) of the kinase. The Km values of KSMP and of meprin β (which reproduces KSMP activity) for the C-subunit are below 1 μM. The Km for peptides containing a stretch of four Glu residues are in the micromolar range, illustrating the significant contribution of this cluster to the substrate recognition of meprin β. This conclusion is supported by a systematic study using a series of the C-subunit mutants with deletions and mutations in the cluster of acidics. Hydrophobic amino acids vicinal to the cleavage site increase the Kcat of the proteinase. These studies unveil a new specificity for meprin β, suggesting new substrates that are 1-2 orders of magnitude better in their Km and Kcat than those commonly used for meprin assay. A search for substrates having such a cluster of acidics and hydrophobics, which are accessible to meprin under physiological conditions, point at gastrin as a potential target. Indeed, meprin β is shown to cleave gastrin at its cluster of five glutamic acid residues and also at the M-D bond within its WMDF-NH2 sequence, which is indispensable for all the known biological activities of gastrins. The latter meprin cleavage will lead to the inactivation of gastrin and thus to the control of its activity.
登录
查看更多内容
表皮生长因子受体作为激酶分裂膜蛋白酶的底物。
DOI：
--
发表时间：
1988
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Seger,R;Yarden,Y;Kashles,O;Goldblatt,D;Schlessinger,J;Shaltiel,S
通讯作者：
Shaltiel,S
使用肽底物和抑制剂绘制 meprin-A 的活性位点。
影响因子：
2.9
作者：
Wolz,RL;Harris,RB;Bond,JS
通讯作者：
Bond,JS
梅普林斯 A 和 B.
影响因子：
--
作者：
Wolz,RL;Bond,JS
通讯作者：
Bond,JS
克隆大鼠 meprin cDNA 表明该酶是异二聚体。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Johnson,GD;Hersh,LB
通讯作者：
Hersh,LB
小鼠 meprin A α 亚基的组织特异性表达和染色体定位。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Jiang,W;Sadler,PM;Jenkins,NA;Gilbert,DJ;Copeland,NG;Bond,JS
通讯作者：
Bond,JS