Drug-tunable multidimensional synthetic gene control using inducible degron-tagged dCas9 effectors.
Drug-tunable multidimensional synthetic gene control using inducible degron-tagged dCas9 effectors.
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DOI：
10.1038/s41467-017-01222-y
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发表时间：
2017-10-30
影响因子：
16.6
通讯作者：
Rosser SJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kleinjan DA;Wardrope C;Nga Sou S;Rosser SJ
与异源反式激活结构域融合的CRISPR-Cas9蛋白的核酸酶失活变体（dCas 9）可以充当哺乳动物细胞中基因表达的有效指导RNA序列定向诱导物或阻遏物。在这样的系统中，稳定的dCas 9效应子的长期存在可能是一个缺点，排除了在受抑制和活化的靶基因表达状态之间快速切换的能力，对细胞中的合成调控回路施加静态环境。为了解决这个问题，我们已经产生了一个工具包的条件降解或稳定的orthogonal dCas 9或Cpf 1效应蛋白，从而打开选项的多维控制的功能活动，通过正交的，药物可调的人工转录因子的组合。与反式激活结构域融合的失活Cas9可用于控制基因表达，然而其存在可阻止不同调控状态之间的快速切换。在这里，作者产生了条件降解的dCas 9和Cpf 1蛋白，用于功能活性的多维控制。
The nuclease-deactivated variant of CRISPR-Cas9 proteins (dCas9) fused to heterologous transactivation domains can act as a potent guide RNA sequence-directed inducer or repressor of gene expression in mammalian cells. In such a system the long-term presence of a stable dCas9 effector can be a draw-back precluding the ability to switch rapidly between repressed and activated target gene expression states, imposing a static environment on the synthetic regulatory circuits in the cell. To address this issue we have generated a toolkit of conditionally degradable or stabilisable orthologous dCas9 or Cpf1 effector proteins, thus opening options for multidimensional control of functional activities through combinations of orthogonal, drug-tunable artificial transcription factors. Deactivated Cas9 fused to transactivation domains can be used to control gene expression, however its presence can prevent rapid switching between different regulatory states. Here the authors generate conditionally degradable dCas9 and Cpf1 proteins for multidimensional control of functional activity.
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