A CRISPR/Cas9 vector system for tissue-specific gene disruption in zebrafish.
A CRISPR/Cas9 vector system for tissue-specific gene disruption in zebrafish.
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DOI：
10.1016/j.devcel.2015.01.032
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发表时间：
2015-03-23
影响因子：
11.8
通讯作者：
Zon LI
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ablain J;Durand EM;Yang S;Zhou Y;Zon LI
基因组编辑的CRISPR/Cas9技术极大地促进了广泛生物体的体外和体内基因的靶向失活。在斑马鱼中，它允许通过简单地将指导RNA（gRNA）和Cas9 mRNA注射到单细胞期胚胎中来快速产生敲除系。在这里，我们报告了一个简单且可扩展的基于CRISPR的载体系统，用于斑马鱼组织特异性基因失活。作为原理的证明，我们使用我们的具有驱动Cas9表达的gata 1启动子的载体来沉默urod基因，urod基因涉及血红素生物合成，特别是在红细胞谱系中。Urod靶向在斑马鱼胚胎中产生红色荧光红细胞，重现了在yquem突变体中观察到的表型。虽然F0胚胎显示嵌合基因破坏，表型出现非常外显在稳定的F1鱼。这种载体系统构成了一个独特的工具，空间控制基因敲除，大大拓宽了斑马鱼功能丧失的研究范围。
CRISPR/Cas9 technology of genome editing has greatly facilitated the targeted inactivation of genes in vitro and in vivo in a wide range of organisms. In zebrafish it allows the rapid generation of knock-out lines by simply injecting a guide RNA (gRNA) and Cas9 mRNA into one-cell stage embryos. Here, we report a simple and scalable CRISPR-based vector system for tissue-specific gene inactivation in zebrafish. As proof of principle, we used our vector with the gata1 promoter driving Cas9 expression to silence the urod gene, implicated in heme biosynthesis, specifically in the erythrocytic lineage. Urod targeting yielded red fluorescent erythrocytes in zebrafish embryos, recapitulating the phenotype observed in the yquem mutant. While F0 embryos displayed mosaic gene disruption, the phenotype appeared very penetrant in stable F1 fish. This vector system constitutes a unique tool to spatially control gene knock-out and greatly broadens the scope of loss-of-function studies in zebrafish.
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影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
Cho, Seung Woo;Kim, Sojung;Kim, Jin-Soo
通讯作者：
Kim, Jin-Soo
影响因子：
7
作者：
Kim, Hye Joo;Lee, Hyung Joo;Kim, Jin-Soo
通讯作者：
Kim, Jin-Soo
DOI：
10.1073/pnas.1308335110
发表时间：
2013-08-20
影响因子：
11.1
作者：
Jao, Li-En;Wente, Susan R.;Chen, Wenbiao
通讯作者：
Chen, Wenbiao
影响因子：
2.7
作者：
Ganis JJ;Hsia N;Trompouki E;de Jong JL;DiBiase A;Lambert JS;Jia Z;Sabo PJ;Weaver M;Sandstrom R;Stamatoyannopoulos JA;Zhou Y;Zon LI
通讯作者：
Zon LI