Genetically Encoded Protein Phosphorylation in Mammalian Cells.
Genetically Encoded Protein Phosphorylation in Mammalian Cells.
复制标题
哺乳动物细胞中遗传编码的蛋白质磷酸化。
DOI：
10.1016/j.chembiol.2018.05.013
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发表时间：
2018-09-20
影响因子：
8.6
通讯作者：
Chin JW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Beránek V;Reinkemeier CD;Zhang MS;Liang AD;Kym G;Chin JW
蛋白质磷酸化调节真核细胞中的多种过程。通过与酶促翻译后修饰正交的途径，在真核细胞中的靶蛋白中安装位点特异性磷酸化的策略将为定义特定磷酸化的后果提供强有力的途径。在这里，我们表明SepRSv1.0/tRNAv1.0CUA对（由海洋甲烷球菌磷酸丝氨酰转移RNA合成酶[MmSepRS]/詹氏甲烷球菌[Mj]tRNAGCACys对产生）在哺乳动物细胞中是正交的。我们创建了一个真核延伸因子1 α（EF-1α）变体EF-1α-Sep，它可以增强磷酸丝氨酸的掺入，并将其与eRF 1的突变体联合收割机结合，并操纵细胞的磷酸丝氨酸生物合成途径，以使磷酸丝氨酸及其不可水解的膦酸酯类似物的遗传编码掺入成为可能。使用这种方法，我们证明了在哺乳动物细胞中的蛋白激酶的合成激活。SepRSv1.0/tRNAv1.0CUA是哺乳动物细胞中的正交对磷酸丝氨酸被遗传定向到哺乳动物细胞中的蛋白质中磷酸丝氨酸的膦酸盐类似物被稳定地掺入哺乳动物细胞中编码的膦酸盐类似物能够激活合成激酶Beránek et al.描述了在哺乳动物细胞中正交的氨酰-tRNA合成酶/tRNA对。他们证明，这对可用于纳入磷酸丝氨酸和稳定的膦酸酯类似物。通过在激酶活化环中编码膦酸酯类似物，它们合成活化激酶。
Protein phosphorylation regulates diverse processes in eukaryotic cells. Strategies for installing site-specific phosphorylation in target proteins in eukaryotic cells, through routes that are orthogonal to enzymatic post-translational modification, would provide a powerful route for defining the consequences of particular phosphorylations. Here we show that the SepRSv1.0/tRNAv1.0CUA pair (created from the Methanococcus maripaludis phosphoseryl-transfer RNA synthetase [MmSepRS]/Methanococcus janaschii [Mj]tRNAGCACys pair) is orthogonal in mammalian cells. We create a eukaryotic elongation factor 1 alpha (EF-1α) variant, EF-1α-Sep, that enhances phosphoserine incorporation, and combine this with a mutant of eRF1, and manipulations of the cell’s phosphoserine biosynthetic pathway, to enable the genetically encoded incorporation of phosphoserine and its non-hydrolyzable phosphonate analog. Using this approach we demonstrate synthetic activation of a protein kinase in mammalian cells. SepRSv1.0/tRNAv1.0CUA is an orthogonal pair in mammalian cells Phosphoserine is genetically directed into proteins in mammalian cells Phosphonate analog of phosphoserine is stably incorporated in mammalian cells Encoded phosphonate analog enables synthetic kinase activation Beránek et al. describe an aminoacyl-tRNA synthetase/tRNA pair that is orthogonal in mammalian cells. They demonstrate that this pair can be used to incorporate phosphoserine and a stable phosphonate analog. By encoding the phosphonate analog in a kinase activation loop, they synthetically activate the kinase.
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影响因子：
48
作者：
Elsässer SJ;Ernst RJ;Walker OS;Chin JW
通讯作者：
Chin JW
DOI：
10.15252/embj.201797902
发表时间：
2018-04-13
期刊：
The EMBO journal
影响因子：
--
作者：
Burgess SG;Mukherjee M;Sabir S;Joseph N;Gutiérrez-Caballero C;Richards MW;Huguenin-Dezot N;Chin JW;Kennedy EJ;Pfuhl M;Royle SJ;Gergely F;Bayliss R
通讯作者：
Bayliss R
影响因子：
16
作者：
Roberts-Galbraith RH;Ohi MD;Ballif BA;Chen JS;McLeod I;McDonald WH;Gygi SP;Yates JR 3rd;Gould KL
通讯作者：
Gould KL
影响因子：
4.8
作者：
Hauenstein, Scott I.;Hou, Ya-Ming;Perona, John J.
通讯作者：
Perona, John J.
影响因子：
46.9
作者：
Pédelacq, JD;Cabantous, S;Waldo, GS
通讯作者：
Waldo, GS