Genetic encoding of a highly photostable, long lifetime fluorescent amino acid for imaging in mammalian cells.
Genetic encoding of a highly photostable, long lifetime fluorescent amino acid for imaging in mammalian cells.
复制标题
DOI：
10.1039/d1sc01914g
复制
发表时间：
2021-09-22
期刊：
影响因子：
8.4
通讯作者：
Petersson EJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jones CM;Robkis DM;Blizzard RJ;Munari M;Venkatesh Y;Mihaila TS;Eddins AJ;Mehl RA;Zagotta WN;Gordon SE;Petersson EJ
吖啶酮丙氨酸（Acd）是一种荧光氨基酸，具有高的光稳定性，在水中具有高的量子产率和长的荧光寿命。这些特性使其上级现有的遗传编码荧光氨基酸，用于通过荧光偏振或寿命实验（包括荧光寿命成像显微镜（FLIM））监测蛋白质相互作用和构象变化。在这里，我们报告的Acd基因掺入使用工程吡咯赖氨酸tRNA合成酶（RS）突变体，允许有效的Acd掺入在两个E。大肠杆菌和哺乳动物细胞。我们比较这些Acd RS的蛋白质产量和氨基酸特异性，以确定最佳构建体。我们还证明了在FLIM中使用Acd，与内源性荧光团和工程荧光蛋白相比，其长寿命提供了强烈的对比度，内源性荧光团和工程荧光蛋白的寿命小于5 ns。吖啶酮丙氨酸（Acd）在水中具有光稳定性、高量子产率和长荧光寿命。进化的tRNA合成酶（RS）使Acd在哺乳动物细胞中的遗传掺入及其在荧光寿命成像显微镜中的应用成为可能。
Acridonylalanine (Acd) is a fluorescent amino acid that is highly photostable, with a high quantum yield and long fluorescence lifetime in water. These properties make it superior to existing genetically encodable fluorescent amino acids for monitoring protein interactions and conformational changes through fluorescence polarization or lifetime experiments, including fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM). Here, we report the genetic incorporation of Acd using engineered pyrrolysine tRNA synthetase (RS) mutants that allow for efficient Acd incorporation in both E. coli and mammalian cells. We compare protein yields and amino acid specificity for these Acd RSs to identify an optimal construct. We also demonstrate the use of Acd in FLIM, where its long lifetime provides strong contrast compared to endogenous fluorophores and engineered fluorescent proteins, which have lifetimes less than 5 ns. Acridonylalanine (Acd) is photostable, with a high quantum yield and long fluorescence lifetime in water. An evolved tRNA synthetase (RS) enables genetic incorporation of Acd in mammalian cells and its use in fluorescence lifetime imaging microscopy.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1039/c7cc05492k
发表时间：
2017-10-05
期刊：
Chemical communications (Cambridge, England)
影响因子：
--
作者：
Ferrie JJ;Ieda N;Haney CM;Walters CR;Sungwienwong I;Yoon J;Petersson EJ
通讯作者：
Petersson EJ
影响因子：
4.6
作者：
Aloush N;Schvartz T;König AI;Cohen S;Brozgol E;Tam B;Nachmias D;Ben-David O;Garini Y;Elia N;Arbely E
通讯作者：
Arbely E
DOI：
10.1073/pnas.1309584110
发表时间：
2013-07-16
影响因子：
11.1
作者：
Chatterjee, Abhishek;Xiao, Han;Schultz, Peter G.
通讯作者：
Schultz, Peter G.
影响因子：
3.5
作者：
Hamada, H;Kameshima, N;Sisido, M
通讯作者：
Sisido, M
影响因子：
16.8
作者：
Dai, Gucan;Aman, Teresa K.;Zagotta, William N.
通讯作者：
Zagotta, William N.