A role for G-proteins in directing G-protein-coupled receptor-caveolae localization.
A role for G-proteins in directing G-protein-coupled receptor-caveolae localization.
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DOI：
10.1021/bi301107p
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发表时间：
2012-11-27
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Scarlata S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Calizo RC;Scarlata S
小凹是一种膜结构域，可能通过隔离特定蛋白质（例如 G 蛋白偶联受体 (GPCR)）来影响细胞信号传导。虽然之前的报道主要表明 Gαq 亚基（而非其他 G 蛋白）与小凹蛋白 Caveolin-1 (Cav1) 强烈相互作用，但在小凹中包含 GPCR 仍存在争议。在这里，我们使用荧光方法来确定小凹对据报道驻留在小凹中的两种 GPCR 的物理和功能特性的影响，即与 Gαq 偶联的缓激肽受体 2 型 (B2R) 和与 Gαi 偶联的 μ-阿片受体 (μOR)。虽然小窝不影响 μOR 介导的 cAMP 信号，但它们会延长 B2R 介导的 Ca2+ 信号。在内源性表达 B2R 和 Cav1 的 A10 细胞中，Cav1 的下调会消除缓激肽刺激后的长时间恢复，这与小凹的存在延长了 Gαq 激活的观点一致。免疫荧光和福斯特共振能量转移 (FRET) 研究表明，很大一部分 B2R 驻留在或靠近小凹结构域，而没有或很少的 μOR 驻留在小凹结构域中。通过下调 Gαq 或添加干扰 Gαq-Caveolin-1 相互作用的肽，可以降低 B2R 和小凹结构域之间的 FRET 水平，这表明 Gαq 促进 B2R 定位到小凹结构域。我们的结果表明，Gαq 可以将其相关受体定位到小凹结构域以增强其信号。
Caveolae are membrane domains that may influence cell signaling by sequestering specific proteins such as G-protein-coupled receptors (GPCRs). While previous reports largely show that Gαq subunits, but not other G-proteins, interact strongly with the caveolae protein, Caveolin-1 (Cav1), the inclusion of GPCRs in caveolae is controversial. Here, we have used fluorescence methods to determine the effect of caveolae on the physical and functional properties of two GPCRs that have been reported to reside in caveolae, bradykinin receptor type 2 (B2R), which is coupled to Gαq, and the μ-opioid receptor (μOR), which is coupled to Gαi. While caveolae do not affect cAMP signals mediated by μOR, they prolong Ca2+ signals mediated by B2R. In A10 cells that endogenously express B2R and Cav1, downregulation of Cav1 ablates the prolonged recovery seen upon bradykinin stimulation in accord with the idea that the presence of caveolae prolongs Gαq activation. Immunofluorescence and Förster resonance energy transfer (FRET) studies show that a significant fraction of B2R resides at or close to caveolae domains while none or very little μOR resides in caveolae domains. The level of FRET between B2R and caveolae is reduced by downregulation of Gαq or by addition of a peptide that interferes with Gαq–Caveolin-1 interactions, suggesting that Gαq promotes localization of B2R to caveolae domains. Our results lead to the suggestion that Gαq can localize its associated receptors to caveolae domains to enhance their signals.
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影响因子：
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作者：
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Scarlata, Suzanne
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作者：
Ju, H;Venema, VJ;Venema, RC
通讯作者：
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DOI：
10.3109/10409231003598812
发表时间：
2010-04
影响因子：
6.5
作者：
Golebiewska U;Scarlata S
通讯作者：
Scarlata S
影响因子：
2.9
作者：
Golebiewska, Urszula;Johnston, Jennifer M.;Scarlate, Suzanne
通讯作者：
Scarlate, Suzanne