Selective editing of Val and Leu methyl groups in high molecular weight protein NMR.
Selective editing of Val and Leu methyl groups in high molecular weight protein NMR.
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DOI：
10.1007/s10858-012-9629-2
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发表时间：
2012-06
影响因子：
2.7
通讯作者：
Chen Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hu W;Namanja AT;Wong S;Chen Y
甲基-TROSY方法的发展和高氘代蛋白质中Ile、Leu和瓦尔甲基的特异性13 C-1H标记使得使用溶液核磁共振（NMR）光谱法研究单独或复合的高分子量蛋白质成为可能。在这里，我们提出了2维（2D）和3维（3D）NMR实验，旨在实现完全分离的甲基共振的瓦尔和Leu，使用相同的前体，α-酮异戊酸或乙酰乳酸标记。2D实验可以分别基于瓦尔或Leu的Cα或Cβ化学位移值进一步选择瓦尔或Leu的甲基共振。在3D光谱中，瓦尔和Leu残基的甲基交叉峰具有相反的符号;因此，不仅可以容易地区分残基类型，而且还可以识别来自同一残基的甲基对。这种方法的可行性，在2D和3D实验中实施，已经在82 kDa的蛋白质，苹果酸合酶G上得到了证明。在这项研究中开发的方法将减少共振重叠，也有利于结构引导的共振分配。
The development of methyl-TROSY approaches and specific 13C–1H labeling of Ile, Leu and Val methyl groups in highly deuterated proteins has made it possible to study high molecular weight proteins, either alone or in complexes, using solution nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. Here we present 2-dimensional (2D) and 3-dimensional (3D) NMR experiments designed to achieve complete separation of the methyl resonances of Val and Leu, labeled using the same precursor, α-ketoisovalerate or acetolactate. The 2D experiment can further select the methyl resonances of Val or Leu based on the Cα or Cβ chemical shift values of Val or Leu, respectively. In the 3D spectrum, the methyl cross peaks of Val and Leu residues have opposite signs; thus, not only can the residue types be easily distinguished, but the methyl pairs from the same residue can also be identified. The feasibility of this approach, implemented in both 2D and 3D experiments, has been demonstrated on an 82 kDa protein, malate synthase G. The methods developed in this study will reduce resonance overlaps and also facilitate structure-guided resonance assignments.
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