Label-Free Single-Molecule Pulldown for the Detection of Released Cellular Protein Complexes.
Label-Free Single-Molecule Pulldown for the Detection of Released Cellular Protein Complexes.
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DOI：
10.1021/acscentsci.2c00602
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发表时间：
2022-09-28
影响因子：
18.2
通讯作者：
Wang, Shaopeng
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ma, Guangzhong;Zhang, Pengfei;Zhou, Xinyu;Wan, Zijian;Wang, Shaopeng
精确和灵敏地检测细胞内蛋白质和复合物是理解信号通路和细胞功能的关键。在这里，我们提出了一种无标记的单分子下拉（LFSMP）技术，用于释放的细胞蛋白质和蛋白质复合物的成像，具有单分子的灵敏度和低样品消耗，每平方毫米几个细胞。LFSMP基于等离子体散射成像，因此可以直接对表面捕获的分子进行成像，而无需标记并量化结合动力学。在本文中，我们展示了LFSMP的检测原理，研究参与信号通路的蛋白质复合物的磷酸化，并探讨如何动力学分析可以用来提高下拉特异性。我们希望我们的技术能够有助于以单分子分辨率揭示细胞中的分子机制。一个等离子体成像技术，用于量化细胞内的蛋白质复合物在单分子水平上使用只有几十个细胞的证明。
Precise and sensitive detection of intracellular proteins and complexes is key to the understanding of signaling pathways and cell functions. Here, we present a label-free single-molecule pulldown (LFSMP) technique for the imaging of released cellular protein and protein complexes with single-molecule sensitivity and low sample consumption down to a few cells per mm2. LFSMP is based on plasmonic scattering imaging and thus can directly image the surface-captured molecules without labels and quantify the binding kinetics. In this paper, we demonstrate the detection principle for LFSMP, study the phosphorylation of protein complexes involved in a signaling pathway, and investigate how kinetic analysis can be used to improve the pulldown specificity. We wish our technique can contribute to uncovering the molecular mechanisms in cells with single-molecule resolution. A plasmonic imaging technique for quantifying intracellular protein complexes at the single-molecule level using only dozens of cells is demonstrated.
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