FLASH assembly of TALENs for high-throughput genome editing.
FLASH assembly of TALENs for high-throughput genome editing.
复制标题
DOI：
10.1038/nbt.2170
复制
发表时间：
2012-05
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
工程转录激活物样效应核酸酶(TALEN)已显示出作为简便和广泛适用的基因组编辑工具的前景。然而，还没有公开可用的高通量方法来构建TALEN，并且仍然缺乏对该技术的成功率和靶向范围的大规模评估。在这里，我们描述了基于Fast Ligation的可自动化固相高通量(闪存)平台，这是我们开发的一种快速且经济高效的方法，用于实现TALEN的大规模组装。我们在基于人类细胞的EGFP报告系统中测试了48对闪光组装的TALEN对，发现所有48对都具有有效的基因修饰活性。我们还使用Flash组装了96个与癌症和/或表观遗传调控有关的内源性人类基因的TALEN，发现其中84对能够有效地引入靶向改变。我们的结果确立了TALEN技术的健壮性，并证明了Flash促进了高通量基因组编辑，其规模是目前工程锌指核酸酶或巨核酸酶无法实现的。
Engineered transcription activator-like effector nucleases (TALENs) have shown promise as facile and broadly applicable genome editing tools. However, no publicly available high-throughput method for constructing TALENs has been published and large-scale assessments of the success rate and targeting range of the technology remain lacking. Here we describe the Fast Ligation-based Automatable Solid-phase High-throughput (FLASH) platform, a rapid and cost-effective method we developed to enable large-scale assembly of TALENs. We tested 48 FLASH-assembled TALEN pairs in a human cell-based EGFP reporter system and found that all 48 possessed efficient gene modification activities. We also used FLASH to assemble TALENs for 96 endogenous human genes implicated in cancer and/or epigenetic regulation and found that 84 pairs were able to efficiently introduce targeted alterations. Our results establish the robustness of TALEN technology and demonstrate that FLASH facilitates high-throughput genome editing at a scale not currently possible with engineered zinc-finger nucleases or meganucleases.
登录
查看更多内容
影响因子：
14.9
作者：
Li T;Huang S;Jiang WZ;Wright D;Spalding MH;Weeks DP;Yang B
通讯作者：
Yang B
影响因子：
3.7
作者：
Geissler R;Scholze H;Hahn S;Streubel J;Bonas U;Behrens SE;Boch J
通讯作者：
Boch J
DOI：
10.1073/pnas.1013133107
发表时间：
2010-12-14
影响因子：
11.1
作者：
Morbitzer, Robert;Roemer, Patrick;Lahaye, Thomas
通讯作者：
Lahaye, Thomas
影响因子：
56.9
作者：
Boch, Jens;Scholze, Heidi;Bonas, Ulla
通讯作者：
Bonas, Ulla
影响因子：
7
作者：
Kim, Hye Joo;Lee, Hyung Joo;Kim, Jin-Soo
通讯作者：
Kim, Jin-Soo