Highly Efficient Genome Editing of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9.
Highly Efficient Genome Editing of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9.
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DOI：
10.1016/j.celrep.2016.09.092
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发表时间：
2016-10-25
期刊：
影响因子：
8.8
通讯作者：
Nakada D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gundry MC;Brunetti L;Lin A;Mayle AE;Kitano A;Wagner D;Hsu JI;Hoegenauer KA;Rooney CM;Goodell MA;Nakada D
通过对小鼠进行基因操作，我们对造血干细胞/祖细胞 (HSPC) 调节机制的理解得到了进一步的提高。然而，种系修饰既耗时又昂贵。在这里，我们描述了使用 CRISPR/Cas9 系统直接修改小鼠和人类 HSPC 基因组的快速、高效且经济有效的方法。使用无质粒和病毒的方式将引导RNA单独递送至表达Cas9的HSPC中，或将Cas9引导RNA核糖核蛋白（RNP）复合物递送至野生型细胞中，我们在小鼠（>60%）和人类（~75%）的原代HSPC中实现了极其有效的基因破坏。这些技术能够快速评估 Eed、Suz12 和 DNMT3A 基因丢失的功能影响。我们还在原代人类 HSPC 中实现了同源定向修复 (>20%)。这些方法将显着扩展 CRISPR/Cas9 技术在正常和恶性造血研究中的应用。
Our understanding of the mechanisms that regulate hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) has been advanced by the ability to genetically manipulate mice; however, germline modification is time-consuming and expensive. Here we describe fast, efficient, and cost-effective methods to directly modify the genomes of mouse and human HSPCs using the CRISPR/Cas9 system. Using plasmid and virus-free delivery of guide RNAs alone into Cas9-expressing HSPCs, or Cas9-guide-RNA ribonucleoprotein (RNP) complexes into wild-type cells, we have achieved extremely efficient gene disruption in primary HSPCs from mouse (>60%) and human (~75%). These techniques enabled rapid evaluation of the functional effects of gene loss of Eed, Suz12, and DNMT3A. We also achieved homology-directed repair in primary human HSPCs (>20%). These methods will significantly expand applications for CRISPR/Cas9 technologies for studying normal and malignant hematopoiesis.
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影响因子：
64.8
作者：
Konermann S;Brigham MD;Trevino AE;Joung J;Abudayyeh OO;Barcena C;Hsu PD;Habib N;Gootenberg JS;Nishimasu H;Nureki O;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
影响因子：
23.9
作者：
Mandal, Pankaj K.;Ferreira, Leonardo M. R.;Collins, Ryan;Meissner, Torsten B.;Boutwell, Christian L.;Friesen, Max;Vrbanac, Vladimir;Garrison, Brian S.;Stortchevoi, Alexei;Bryder, David;Musunuru, Kiran;Brand, Harrison;Tager, Andrew M.;Allen, Todd M.;Talkowski, Michael E.;Rossi, Derrick J.;Cowan, Chad A.
通讯作者：
Cowan, Chad A.
影响因子：
64.8
作者：
Genovese, Pietro;Schiroli, Giulia;Escobar, Giulia;Di Tomaso, Tiziano;Firrito, Claudia;Calabria, Andrea;Moi, Davide;Mazzieri, Roberta;Bonini, Chiara;Holmes, Michael C.;Gregory, Philip D.;van der Burg, Mirjam;Gentner, Bernhard;Montini, Eugenio;Lombardo, Angelo;Naldini, Luigi
通讯作者：
Naldini, Luigi
影响因子：
46.9
作者：
Heck, Dirk;Kowalczyk, Monika S.;Yudovich, David;Belizaire, Roger;Puram, Rishi V.;McConkey, Marie E.;Thielke, Anne;Aster, Jon C.;Regev, Aviv;Ebert, Benjamin L.
通讯作者：
Ebert, Benjamin L.
影响因子：
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作者：
Hsu PD;Lander ES;Zhang F
通讯作者：
Zhang F