Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.
Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.
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DOI：
10.1016/j.cell.2014.07.017
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发表时间：
2014-08-14
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Gradinaru V
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang B;Treweek JB;Kulkarni RP;Deverman BE;Chen CK;Lubeck E;Shah S;Cai L;Gradinaru V
了解细胞、回路和器官范围内的结构与功能关系需要 3D 解剖和表型图，而目前跨物种的许多器官都无法获得这些图。这种知识差距的根源在于缺乏能够进行全器官成像的方法。在此，我们提出了组织透明化技术，其中整个器官和身体被赋予大分子可渗透性和光学透明性，从而暴露其具有完整连接性的细胞结构。我们描述了 PACT，这是一种用于被动组织透明化和完整器官免疫染色的方案； RIMS，一种用于厚组织成像的折射率匹配介质；和 PARS，一种全身清除和免疫标记的方法。我们证明，在啮齿动物中，PACT、RIMS 和 PARS 与内源荧光、免疫组织化学、RNA 单分子 FISH、长期储存以及具有细胞和亚细胞分辨率的显微镜兼容。这些方法适用于完整器官和体内正常和病理元素的高分辨率、高内涵绘图和表型分析。
Understanding the structure-function relationships at cellular, circuit, and organ-wide scale requires 3D anatomical and phenotypical maps, currently unavailable for many organs across species. At the root of this knowledge gap is the absence of a method that enables whole-organ imaging. Herein we present techniques for tissue clearing in which whole organs and bodies are rendered macromolecule-permeable and optically-transparent, thereby exposing their cellular structure with intact connectivity. We describe PACT, a protocol for passive tissue clearing and immunostaining of intact organs; RIMS, a refractive index matching media for imaging thick tissue; and PARS, a method for whole-body clearing and immunolabeling. We show that in rodents PACT, RIMS, and PARS are compatible with endogenous-fluorescence, immunohistochemistry, RNA single-molecule FISH, long-term storage, and microscopy with cellular and subcellular resolution. These methods are applicable for high-resolution, high-content mapping and phenotyping of normal and pathological elements within intact organs and bodies.
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影响因子：
3.7
作者：
Moy AJ;Wiersma MP;Choi B
通讯作者：
Choi B
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48
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通讯作者：
Deisseroth, Karl
影响因子：
--
作者：
Becker, Klaus;Jahrling, Nina;Dodt, Hans-Ulrich
通讯作者：
Dodt, Hans-Ulrich
DOI：
10.3791/3564
发表时间：
2012-07-30
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Gage, Gregory J;Kipke, Daryl R;Shain, William
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Shain, William
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作者：
Femino, A;Fay, FS;Singer, RH
通讯作者：
Singer, RH