Mode of Ezrin-Membrane Interaction as a Function of PIP2 Binding and Pseudophosphorylation.
Mode of Ezrin-Membrane Interaction as a Function of PIP2 Binding and Pseudophosphorylation.
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Ezrin-膜相互作用模式作为 PIP2 结合和假磷酸化的函数
DOI：
10.1016/j.bpj.2016.05.009
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发表时间：
2016
影响因子：
3.4
通讯作者：
Steinem
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shabardina;Kramer;Gerdes;Braunger;Cordes;Schäfer;Steinem
埃兹蛋白是埃兹蛋白、根蛋白、膜突蛋白（ERM）家族的一种蛋白质，在质膜和细胞骨架之间提供调节的连接。这种连接的标志是通过磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP 2）结合和位置567处的苏氨酸磷酸化激活ezrin。为了分析这些激活因子对脂质膜上Ezrin组织的影响和提出的伴随的低聚物-单体转变，我们利用支持的脂质双层结合原子力显微镜和荧光显微镜。用PIP 2作为ezrin的天然受体脂质或Ni-次氮基三乙酸装备的脂质掺杂以通过其His 6-标签将蛋白质结合到脂质膜的双层用于结合两种不同的ezrin变体：ezrin野生型和ezrin T567 D模拟磷酸化状态。使用反射干涉光谱，原子力显微镜，和Förster共振能量转移实验的组合，我们表明，只有ezrin T567 D突变体，在结合到含PIP 2的双层，经历了显着的构象变化，我们归因于开放的构象导致单体蛋白的脂质双层。
Ezrin, a protein of the ezrin, radixin, moesin (ERM) family, provides a regulated linkage between the plasma membrane and the cytoskeleton. The hallmark of this linkage is the activation of ezrin by phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PIP2) binding and a threonine phosphorylation at position 567. To analyze the influence of these activating factors on the organization of ezrin on lipid membranes and the proposed concomitant oligomer-monomer transition, we made use of supported lipid bilayers in conjunction with atomic force microscopy and fluorescence microscopy. Bilayers doped with either PIP2as the natural receptor lipid of ezrin or a Ni-nitrilotriacetic acid-equipped lipid to bind the proteins via their His6-tags to the lipid membrane were used to bind two different ezrin variants: ezrin wild-type and ezrin T567D mimicking the phosphorylated state. Using a combination of reflectometric interference spectroscopy, atomic force microscopy, and Förster resonance energy transfer experiments, we show that only the ezrin T567D mutant, upon binding to PIP2-containing bilayers, undergoes a remarkable conformational change, which we attribute to an opening of the conformation resulting in monomeric protein on the lipid bilayer.
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