A versatile platform to analyze low-affinity and transient protein-protein interactions in living cells in real time.
A versatile platform to analyze low-affinity and transient protein-protein interactions in living cells in real time.
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DOI：
10.1016/j.celrep.2014.10.058
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发表时间：
2014-12-11
期刊：
影响因子：
8.8
通讯作者：
Wahl GM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li YC;Rodewald LW;Hoppmann C;Wong ET;Lebreton S;Safar P;Patek M;Wang L;Wertman KF;Wahl GM
蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)在协调生物过程中发挥着核心作用。虽然有些PPI是稳定的，但许多重要的PPI是暂时的，很难用传统方法检测到。我们开发了ReBiL，一个重组酶增强的双分子荧光素酶互补平台，能够在活细胞中检测微弱的PPI。ReBiL很容易发现E3泛素连接酶和E2泛素结合酶之间具有挑战性的瞬时相互作用。ReBiL在不同条件下快速检测PPI的能力表明，一些装订的α-螺旋多肽是一类新的PPI拮抗剂，可以诱导靶点非依赖性的胞浆渗漏和细胞毒作用，这种作用可以被血清拮抗。这些结果解释了无血清条件下检测装订多肽活性的要求，并定义了评估多肽拮抗剂方法所需的参数。ReBiL能够加快PPI分析、评估靶点特异性和细胞渗透性，并揭示PPI修饰剂的非靶点效应，这应该有助于开发有效的、细胞渗透性的PPI疗法，并阐述不同的生物学机制。
Protein-protein interactions (PPIs) play central roles in orchestrating biological processes. While some PPIs are stable, many important ones are transient and hard to detect with conventional approaches. We developed ReBiL, a recombinase enhanced bimolecular luciferase complementation platform, to enable weak PPI detection in living cells. ReBiL readily identified challenging transient interactions between an E3 ubiquitin ligase and an E2 ubiquitin-conjugating enzyme. ReBiL’s ability to rapidly interrogate PPIs in diverse conditions revealed that some stapled α-helical peptides, a new class of PPI antagonists, induce target-independent cytosolic leakage and cytotoxicity that is antagonized by serum. These results explain the requirement for serum-free conditions to detect stapled peptide activity, and define a required parameter to evaluate for peptide antagonist approaches. ReBiL’s ability to expedite PPI analysis, assess target specificity and cell permeability, and to reveal off-target effects of PPI modifiers should facilitate development of effective, cell permeable PPI therapeutics and elaboration of diverse biological mechanisms.
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影响因子：
7.3
作者：
Ilagan MX;Lim S;Fulbright M;Piwnica-Worms D;Kopan R
通讯作者：
Kopan R
DOI：
10.1074/jbc.m111.244632
发表时间：
2011-09-16
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Hodson C;Cole AR;Lewis LP;Miles JA;Purkiss A;Walden H
通讯作者：
Walden H
DOI：
10.1073/pnas.1303002110
发表时间：
2013-09-03
影响因子：
11.1
作者：
Chang, Yong S.;Graves, Bradford;Sawyer, Tomi K.
通讯作者：
Sawyer, Tomi K.
DOI：
10.1073/pnas.1203789109
发表时间：
2012-07-17
影响因子：
11.1
作者：
Graves, Bradford;Thompson, Thelma;Vassilev, Lyubomir T.
通讯作者：
Vassilev, Lyubomir T.
影响因子：
82.9
作者：
Gembarska, Agnieszka;Luciani, Flavie;Fedele, Clare;Russell, Elisabeth A.;Dewaele, Michael;Villar, Stephanie;Zwolinska, Aleksandra;Haupt, Sue;de Lange, Job;Yip, Dana;Goydos, James;Haigh, Jody J.;Haupt, Ygal;Larue, Lionel;Jochemsen, Aart;Shi, Hubing;Moriceau, Gatien;Lo, Roger S.;Ghanem, Ghanem;Shackleton, Mark;Bernal, Federico;Marine, Jean-Christophe
通讯作者：
Marine, Jean-Christophe