Hexestrol diazirine photoaffinity labeling reagent for the estrogen receptor.
Hexestrol diazirine photoaffinity labeling reagent for the estrogen receptor.
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Hexestrol diazirine 雌激素受体光亲和标记试剂。
DOI：
10.1021/bc00026a006
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发表时间：
1994
影响因子：
4.7
通讯作者：
Katzenellenbogen,JA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bergmann,KE;Carlson,KE;Katzenellenbogen,JA
3-叠氮丁基 (2fi*, 3S*)-2, 3-双 (4-羟基苯基) 戊基硫醚 (1) 是一种雌激素受体 (ER) 的光亲和标记试剂，已以未标记和高比活性氚标记形式 (32 Ci/mmol) 制备，并已被证明能够选择性且有效地光共价附着于大鼠子宫 ER。通过竞争性结合测定和直接结合测定（相对结合：分别为雌二醇= 100;(1)= 17.K¿.雌二醇= 0.19 nM;(1)= 0.98 nM），Diazirine 1 表现出对 ER 的高结合亲和力。它对 ER 的位点特异性光灭活有效，在 > 315 nm 照射 5 分钟后达到 31% 的水平。氚标记的二氮丙啶 [3H]-1 与 ER 发生特异性光共价附着，附着效率为 29%，选择性为 90%。对于光亲和试剂来说，这两个值都相当高。对光标记蛋白质的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示，在 Mr 65 000 处对主要物种进行了特异性标记，该物种与 [3H] 他莫昔芬氮丙啶（一种充分表征的 ER 亲和标记）标记的物种相同。 Hexestrol diazirine 1 是第一个产生卡宾的光亲和标记，可以高效、选择性地共价标记 ER，它应该有助于进一步研究 ER 的激素结合域。
3-Azibutyl (2fi*, 3S*)-2, 3-bis (4-hydroxyphenyl) pentyl sulfide (1), a photoaffinity labeling reagent for the estrogen receptor (ER), has been prepared in unlabeled and in high specific activity tritium-labeled form (32 Ci/mmol) and has been shown toundergo selective and efficient photocovalent attachment to rat uterine ER. Diazirine 1 demonstrates high binding affinity for ER, as determined by both a competitive binding assay and a direct binding assay (relative binding: estradiol= 100;(1)= 17. K¿. estradiol= 0.19 nM;(1)= 0.98 nM, respectively). It is efficient in site-specific photoinactivation of ER, reaching the level of 31% after 5 min of irradiation at> 315 nm. The tritium-labeled diazirine [3H]-1 undergoes specific photocovalent attachment to ER with an attachment efficiency of 29% and a selectivity of 90%. Both of these values are quite high for a photoaffinity reagent. SDS-polyacrylamide gel electrophoretic analysis of the photolabeled proteins shows specific labeling of a major species at Mr 65 000, the same species that is labeled by [3H] tamoxifen aziridine, a well-characterized affinity label for ER. Hexestrol diazirine 1 is the first carbene-generating photoaffinity label that covalently labels ER with high efficiency and selectivity, and it should be useful in further studies on the hormone-binding domain of ER.
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