Characterization of a 52K protein of murine cytomegalovirus and its immunological cross-reactivity with the DNA-binding protein ICP36 of human cytomegalovirus.
Characterization of a 52K protein of murine cytomegalovirus and its immunological cross-reactivity with the DNA-binding protein ICP36 of human cytomegalovirus.
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鼠巨细胞病毒 52K 蛋白的表征及其与人巨细胞病毒 DNA 结合蛋白 ICP36 的免疫交叉反应。
DOI：
10.1099/0022-1317-72-6-1421
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发表时间：
1991
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Zaia,JA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pande,H;Campo,K;Shanley,JD;Creeger,ES;Artishevsky,A;Gallez-Hawkins,G;Zaia,JA
我们培育了一株杂交瘤，命名为25G11，该杂交瘤能产生与小鼠巨细胞病毒52K蛋白反应的单克隆抗体（MAb）。免疫印迹分析显示，该单抗25G11在mcmv感染的细胞裂解物中与52K蛋白带反应，在人CMV （HCMV）感染的细胞裂解物中与49K蛋白带反应。与纯化的MCMV病毒粒子一起，25G11产生了52K的微弱免疫反应带。然而，纯化的HCMV病毒粒子、纯化的HCMV或MCMV包膜制剂均未检测到免疫反应蛋白带。通过免疫细胞化学，25G11主要在HCMV或mcmv感染细胞的细胞核中检测到病毒抗原。抗体25G11用于筛选HCMV DNA片段的λgt11文库。其中一个分离的克隆（λ32323B）被用于HCMV基因组的基因定位，表明免疫反应性HCMV蛋白是dna结合蛋白（ICP36）。重组融合蛋白与抗体25G11和HCMV dna结合蛋白特异性MAb （CH16）的分析证实了交叉反应蛋白为ICP36。此外，我们发现25G11识别的表位在HCMV和MCMV蛋白之间是保守的，而CH16识别的表位是HCMV独有的，因此代表了蛋白质中的可变区域。
We have developed a hybridoma, designated 25G11, which produced a monoclonal antibody (MAb) reactive with a 52K protein of murine cytomegalovirus (MCMV). This MAb, 25G11, was reactive with a protein band of 52K in MCMV-infected cell lysates and with a protein of 49K in human CMV (HCMV)-infected cell lysates as detected by immunoblot analysis. With purified MCMV virions, 25G11 gave a faintly immunoreactive band of 52K. However, no immunoreactive protein band was detected with purified HCMV virions, nor with purified HCMV or MCMV envelope preparations. By immunocytochemistry, 25G11 detected viral antigen primarily in the nucleus of HCMV- or MCMV-infected cells. The antibody 25G11 was used to screen a λgt11 library of HCMV DNA fragments. One of the isolated clones (λ32323B) was employed for gene mapping on the HCMV genome, which suggested that the immunoreactive HCMV protein was the DNA-binding protein (ICP36). Analysis of the recombinant fusion protein with antibody 25G11 and with an MAb (CH16) specific for an HCMV DNA-binding protein confirmed the identity of the cross-reacting protein as ICP36. Furthermore, we found that whereas the epitope recognized by 25G11 was conserved between HCMV and MCMV proteins, the epitope recognized by CH16 was unique to HCMV and thus represents a variable region in the protein.
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