Single-molecule FRET imaging of GPCR dimers in living cells.
Single-molecule FRET imaging of GPCR dimers in living cells.
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DOI：
10.1038/s41592-021-01081-y
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发表时间：
2021-04
期刊：
影响因子：
48
通讯作者：
Javitch JA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Asher WB;Geggier P;Holsey MD;Gilmore GT;Pati AK;Meszaros J;Terry DS;Mathiasen S;Kaliszewski MJ;McCauley MD;Govindaraju A;Zhou Z;Harikumar KG;Jaqaman K;Miller LJ;Smith AW;Blanchard SC;Javitch JA
已知C类G蛋白偶联受体（GPCR）形成对功能至关重要的稳定的同源二聚体或异源二聚体，但是构成所有GPCR的>90%的A类和B类受体的寡聚体状态仍然存在激烈争论。单分子荧光共振能量转移（smFRET）是一种强大的方法，有可能揭示GPCR组织的有价值的见解，但很少用于活细胞研究蛋白质系统。在这里，我们报告普遍适用的方法，使用smFRET检测和跟踪跨膜蛋白质扩散的哺乳动物细胞的质膜内。我们利用这种细胞内的smFRET方法来显示激动剂诱导的结构动力学在个别代谢型谷氨酸受体二聚体。我们将这些方法应用于代表性的A，B和C类受体，分别为受体单体，密度依赖性二聚体和组成性二聚体找到证据。
Class C G protein-coupled receptors (GPCRs) are known to form stable homodimers or heterodimers critical for function, but the oligomeric status of class A and B receptors, which constitute >90% of all GPCRs, remains hotly debated. Single-molecule fluorescence resonance energy transfer (smFRET) is a powerful approach with the potential to reveal valuable insights into GPCR organization but has rarely been used in living cells to study protein systems. Here, we report generally applicable methods for using smFRET to detect and track transmembrane proteins diffusing within the plasma membrane of mammalian cells. We leverage this in-cell smFRET approach to show agonist-induced structural dynamics within individual metabotropic glutamate receptor dimers. We apply these methods to representative class A, B and C receptors, finding evidence for receptor monomers, density-dependent dimers and constitutive dimers, respectively.
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影响因子：
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作者：
Kawashima, Nagako;Nakayama, Kenichi;Biju, Vasudevanpillai
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Biju, Vasudevanpillai
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Smith, Adam W.
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作者：
Gregorio GG;Masureel M;Hilger D;Terry DS;Juette M;Zhao H;Zhou Z;Perez-Aguilar JM;Hauge M;Mathiasen S;Javitch JA;Weinstein H;Kobilka BK;Blanchard SC
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Altman, Roger B.;Terry, Daniel S.;Zhou, Zhou;Zheng, Qinsi;Geggier, Peter;Kolster, Rachel A.;Zhao, Yongfang;Javitch, Jonathan A.;Warren, J. David;Blanchard, Scott C.
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作者：
Lacy MM;Baddeley D;Berro J
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Berro J