Rapid hierarchical assembly of medium-size DNA cassettes.
Rapid hierarchical assembly of medium-size DNA cassettes.
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DOI：
10.1093/nar/gks236
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发表时间：
2012-07
影响因子：
14.9
通讯作者：
Benenson Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schmid-Burgk JL;Xie Z;Frank S;Virreira Winter S;Mitschka S;Kolanus W;Murray A;Benenson Y
合成生物学应用需要有效的方法来产生编码复杂基因回路的大基因盒，以避免同时递送编码单个基因的多个质粒。已经提出了多种方法来实现这一目标。在这里，我们描述了一种新的方案，允许一步克隆多达四个基因大小的DNA片段，然后将这些串联序列第二次组装成大的环状DNA。这里描述的方案包括一个简单，廉价和快速的解决方案，用于常规构建具有多达10个基因大小的组件的盒。
Synthetic biology applications call for efficient methods to generate large gene cassettes that encode complex gene circuits in order to avoid simultaneous delivery of multiple plasmids encoding individual genes. Multiple methods have been proposed to achieve this goal. Here, we describe a novel protocol that allows one-step cloning of up to four gene-size DNA fragments, followed by a second assembly of these concatenated sequences into large circular DNA. The protocols described here comprise a simple, cheap and fast solution for routine construction of cassettes with up to 10 gene-size components.
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