Identification of an organic anion transport system in the human colon carcinoma cell line HT29 clone 19A
Identification of an organic anion transport system in the human colon carcinoma cell line HT29 clone 19A
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人结肠癌细胞系HT29克隆19A中有机阴离子转运系统的鉴定
DOI：
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发表时间：
2000
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
G. Rechkemmer
中科院分区：
文献类型：
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作者：
S. Abrahamse;G. Rechkemmer
抽象的。通过测定细胞内 Fluo-3 和呋喃红积累以及测量 Fluo-3 流出，研究了人结肠癌细胞系 HT29 cl.19A 的有机阴离子转运蛋白活性。有机阴离子转运系统的调节剂用于识别参与染料挤出的转运蛋白。在含有 10 µM Fluo-3/AM 和 fura-red/AM 的染料加载培养基中添加丙磺舒，导致细胞中 Fluo-3 和 fura-red 积累呈剂量依赖性增加。在丙磺舒存在下，细胞中fluo-3积累的增加可以通过该化合物对fluo-3流出的抑制作用来解释。 Fluo-3 从细胞中的流出也受到另一种有机阴离子转运抑制剂 sulfinpyrazone 的抑制。肾丙磺舒敏感的有机阴离子交换机制的底物以及多药耐药相关蛋白（MRP）活性的调节剂不影响fluo-3的挤出速率。然而，减少细胞内 ATP 含量完全阻止了 Fluo-3 的排出。此外，MRP 抑制剂 MK571 显着刺激染料积累，而多药耐药基因 (MDR1) 产物 P-糖蛋白、环孢菌素 A 和维拉帕米的抑制剂则不会。由于丙磺舒抑制 Fluo-3 穿过生长在渗透性支持物上的细胞顶膜的流出，我们得出结论，丙磺舒敏感的有机阴离子转运蛋白存在于 HT29 cl.19A 细胞的顶膜中。该有机阴离子转运系统不同于 MDR1 和 MRP2。
Abstract. The human colon carcinoma cell line HT29 cl.19A was studied for organic anion transporter activity by determining intracellular fluo-3 and fura-red accumulation and by measuring fluo-3 efflux. Modulators of organic anion transport systems were used to identify the transporters that are involved in dye extrusion. Addition of probenecid to the dye-loading medium, containing 10 µM fluo-3/AM and fura-red/AM, resulted in a dose-dependent increase in fluo-3 and fura-red accumulation in the cells. The increase in fluo-3 accumulation in the cells in the presence of probenecid was explained by the inhibitory effect of this compound on fluo-3 efflux. Fluo-3 efflux from the cells was also inhibited by sulfinpyrazone, another inhibitor of organic anion transport. Substrates of renal probenecid-sensitive organic anion exchange mechanisms as well as modulators of multidrug resistance associated protein (MRP) activity did not influence fluo-3 extrusion rates. However, reducing intracellular ATP contents completely blocked fluo-3 extrusion. Moreover, MK571, an inhibitor of MRP, significantly stimulated dye accumulation, whereas inhibitors of the multidrug resistance gene (MDR1) product P-glycoprotein, cyclosporin A and verapamil, did not. As probenecid inhibits fluo-3 efflux across the apical membrane of cells grown on permeable supports, we conclude that a probenecid-sensitive organic anion transporter is present in the apical membrane of HT29 cl.19A cells. This organic anion transport system differs from MDR1 and MRP2.
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G. Jedlitschky;I. Leier;U. Buchholz;M. Center;D. Keppler
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通讯作者：
J. Richie;L. Skowroński;P. Abraham;Y. Leutzinger
有机阴离子转运抑制剂，有助于使用 fura-2 测量胞质游离 Ca2。
影响因子：
--
作者：
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通讯作者：
Silverstein,SC