Enrichment of spermatogonia by density gradient centrifugation for use as a donor of surrogate production of tiger puffer
Enrichment of spermatogonia by density gradient centrifugation for use as a donor of surrogate production of tiger puffer
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密度梯度离心富集精原细胞作为虎河豚代孕供体
DOI：
10.1111/are.15905
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发表时间：
2022
影响因子：
2
通讯作者：
Yoshiura Yasutoshi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yoshikawa Hiroyuki;Ino Yasuko;Shigematsu Atsushi;Yoshiura Yasutoshi
采用替代亲鱼技术从冷冻保存的睾丸生殖细胞中生产功能性配子是保护红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）水产遗传资源的有力工具。在各种睾丸细胞中，只有A型精原细胞（ASG）可以定殖受体性腺并转移到配子发生;因此，ASG富集是成功生产替代品的重要因素。考虑到ASG的实际应用，本研究探讨了通过密度梯度离心富集ASG用于替代品生产的可能性。通过Percoll密度梯度离心，从细胞形态和血管表达上估计ASGs的最高分布在20%Percoll层的分数处。将这些分离的睾丸细胞腹腔内移植并成功地整合到受体草河豚（T。alboplumbeus）;然而，在移植未分级睾丸细胞的对照受体中没有观察到定殖。此外，这些受体正常成熟并产生功能性供体来源的配子，虎河豚后代就是从这些配子中产生的。因此，在这项研究中开发的Percoll梯度离心能够富集ASG从睾丸细胞，包括许多分化的生殖细胞，并将是有用的，有效地管理亲鱼所需的遗传性状。
A method of producing functional gametes from cryopreserved testicular germ cells using surrogate broodstock technology is a powerful tool for preserving the aquacultural genetic resources of the tiger puffer (Takifugu rubripes). Among the various testicular cells, only type A spermatogonia (ASGs) can colonize recipient gonads and shift to gametogenesis; therefore, ASG enrichment is an important factor for successful surrogate production. This study examined the possibility of ASG enrichment by density gradient centrifugation for surrogate production, considering its practical use. Through density gradient centrifugation with Percoll media, the highest distribution of ASGs estimated on the cell morphology andvasaexpression was counted at a fraction of 20% Percoll layer. These fractionated testicular cells were transplanted intraperitoneally and successfully incorporated into the gonads of the recipient, grass puffer (T. alboplumbeus); however, no colonization was observed in the control recipients transplanted with unfractionated testicular cells. Moreover, these recipients matured normally and produced functional donor‐derived gametes from which tiger puffer offspring originated. Thus, the Percoll gradient centrifugation developed in this study enables the enrichment of ASGs from testicular cells, including many differentiated germ cells, and would be useful for efficiently managing broodstock with desirable genetic traits.
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