Towards Reverse Vaccinology for Bovine TB: High Throughput Expression of Full Length Recombinant Mycobacterium bovis Proteins.
Towards Reverse Vaccinology for Bovine TB: High Throughput Expression of Full Length Recombinant Mycobacterium bovis Proteins.
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DOI：
10.3389/fmolb.2022.889667
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发表时间：
2022
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5
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中科院分区：
文献类型：
--
作者：
牛结核由牛分枝杆菌引起，是造成牲畜经济损失和人类人畜共患结核的重要全球病原体。几种疫苗方法正在开发中，包括反向疫苗学，它使用无偏见的方法选择潜在候选疫苗的开放阅读框架（ORF），将其作为重组蛋白生产，并通过直接免疫评估其免疫原性。为了提供这种方法的可行性数据，我们从牛分枝杆菌基因组中克隆并表达了123个orf，使用大肠杆菌和昆虫细胞的混合表达。我们使用连接的开放阅读框设计来减少已知相互作用的蛋白质对所需的克隆和单链融合蛋白的数量，例如PPE-PE家族的成员。超过60%的克隆在一个或另一个宿主中表现出可溶性表达，并且大多数克隆可以从宿主细胞背景中快速纯化标记的bTB蛋白。重组蛋白目录代表了一种资源，可能适合用于开发有效的结核分枝杆菌疫苗的试验免疫。
Bovine tuberculosis caused by Mycobacterium bovis, is a significant global pathogen causing economic loss in livestock and zoonotic TB in man. Several vaccine approaches are in development including reverse vaccinology which uses an unbiased approach to select open reading frames (ORF) of potential vaccine candidates, produce them as recombinant proteins and assesses their immunogenicity by direct immunization. To provide feasibility data for this approach we have cloned and expressed 123 ORFs from the M. bovis genome, using a mixture of E. coli and insect cell expression. We used a concatenated open reading frames design to reduce the number of clones required and single chain fusion proteins for protein pairs known to interact, such as the members of the PPE-PE family. Over 60% of clones showed soluble expression in one or the other host and most allowed rapid purification of the tagged bTB protein from the host cell background. The catalogue of recombinant proteins represents a resource that may be suitable for test immunisations in the development of an effective bTB vaccine.
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