An optimized protocol to analyze membrane protein degradation in yeast using quantitative western blot and flow cytometry.
An optimized protocol to analyze membrane protein degradation in yeast using quantitative western blot and flow cytometry.
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利用定量western blot和流式细胞术分析酵母膜蛋白降解的优化方案。
DOI：
10.1016/j.xpro.2022.101274
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发表时间：
2022-06-17
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Li M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Arines FM;Li M
膜蛋白(MPS)在许多细胞功能中是必不可少的。为了维持蛋白平衡，MPS通过泛素化和降解被下调。在这里，我们描述了一种优化的方法来分析MP的降解，使用定量的蛋白质印迹和基于流式细胞术的方法。我们使用液泡膜赖氨酸转运蛋白Ypq1的降解来演示该方案，该方案可以适用于其他细胞器MPS，从而为研究酵母和其他模式生物中MP的调控提供了有用的工具。有关本议定书的使用和执行的完整细节，请参阅和。定量酵母膜蛋白降解的两种互补方法用定量Western印迹法测量全长蛋白质的减少，用流式细胞术测量GFP荧光的猝灭，适用于其他荧光蛋白标记，哺乳动物细胞膜蛋白(MPS)在许多细胞功能中是必不可少的。为了维持蛋白平衡，MPS通过泛素化和降解被下调。在这里，我们描述了一种优化的方法来分析MP的降解，使用定量的蛋白质印迹和基于流式细胞术的方法。我们使用液泡膜赖氨酸转运蛋白Ypq1的降解来演示该方案，该方案可以适用于其他细胞器MPS，从而为研究酵母和其他模式生物中MP的调控提供了有用的工具。
Membrane proteins (MPs) are essential in many cellular functions. To maintain proteostasis, MPs are downregulated via ubiquitination and degradation. Here, we describe an optimized protocol to analyze MP degradation using quantitative western blot and flow cytometry-based approaches. We use the degradation of Ypq1, a vacuole membrane lysine transporter, to demonstrate the protocol, which can be adapted for other organelle MPs and thus provide useful tools to study MP regulation in yeast and other model organisms. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to and. Two complementary protocols for quantifying membrane protein degradation in yeast Measures the decrease of full-length protein by quantitative western blot Quantifies the quenching of GFP fluorescence by flow cytometry Adaptable to other fluorescent protein tags and mammalian cells Membrane proteins (MPs) are essential in many cellular functions. To maintain proteostasis, MPs are downregulated via ubiquitination and degradation. Here, we describe an optimized protocol to analyze MP degradation using quantitative western blot and flow cytometry-based approaches. We use the degradation of Ypq1, a vacuole membrane lysine transporter, to demonstrate the protocol, which can be adapted for other organelle MPs and thus provide useful tools to study MP regulation in yeast and other model organisms.
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影响因子：
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作者：
Gietz, R. Daniel;Schiestl, Robert H.
通讯作者：
Schiestl, Robert H.
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作者：
Cattoglio，Claudia;Darzacq，Xavier;Hansen，Anders S.
通讯作者：
Hansen，Anders S.
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作者：
Katzmann, DJ;Babst, M;Emr, SD
通讯作者：
Emr, SD
DOI：
10.1083/jcb.201611029
发表时间：
2017-10-02
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Oku M;Maeda Y;Kagohashi Y;Kondo T;Yamada M;Fujimoto T;Sakai Y
通讯作者：
Sakai Y
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3.4
作者：
Patterson, GH;Knobel, SM;Piston, DW
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Piston, DW