A quantitative fluorescence-based steady-state assay of DNA polymerase.
A quantitative fluorescence-based steady-state assay of DNA polymerase.
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DOI：
10.1111/febs.12760
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发表时间：
2014-04
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hay S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Driscoll MD;Rentergent J;Hay S
结合DNA的荧光染料已被证明是用于定量DNA和体外测量DNA聚合酶和核酸酶活性的放射性同位素的有用替代物。然而，这种方法通常以半定量的方式用于确定反应的相对速率。在这份报告中，我们展示了一种使用染料PicoGreen同时定量DNA单链和双链形式的方法。这种方法用于DNA聚合酶Klenow片段exo−的稳态测定，其中我们确定了与文献值非常一致的DNA聚合酶的kcat和Km值。
Fluorescent dyes that bind DNA have been demonstrated as a useful alternative to radionucleotides for the quantification of DNA and the in vitro measurement of the activity of DNA polymerases and nucleases. However, this approach is generally used in a semi‐quantitative way to determine relative rates of reaction. In this report, we demonstrate a method for the simultaneous quantification of DNA in both its single‐strand and double‐strand forms using the dye PicoGreen. This approach is used in a steady‐state assay of DNA polymerase Klenow fragment exo−, where we determine kcat and Km values for the DNA polymerase that are in excellent agreement with literature values.
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影响因子：
2
作者：
Abiodun, Oyindamola O.;Gbotosho, Grace O.;Oduola, Ayoade M. J.
通讯作者：
Oduola, Ayoade M. J.
DOI：
10.1016/j.bbapap.2009.07.021
发表时间：
2010-05
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Joyce CM
通讯作者：
Joyce CM
影响因子：
2.9
作者：
Bertram JG;Oertell K;Petruska J;Goodman MF
通讯作者：
Goodman MF
影响因子：
2.9
作者：
FREY, MW;SOWERS, LC;BENKOVIC, SJ
通讯作者：
BENKOVIC, SJ
影响因子：
2.2
作者：
Dragan, A. I.;Bishop, E. S.;Geddes, C. D.
通讯作者：
Geddes, C. D.