A method for generating precise gene deletions and insertions in Escherichia coli
A method for generating precise gene deletions and insertions in Escherichia coli
复制标题
一种在大肠杆菌中产生精确基因删除和插入的方法
DOI：
10.1007/s11274-009-0305-y
复制
发表时间：
2010-01
影响因子：
4.1
通讯作者：
Fan, Dong-Jie
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou, Jun-Mei;Zhou, Qi-Ming;Xie, Jiang-Bi;Liu, Chuan-Peng;Fan, Dong-Jie
本文介绍了一种简单而通用的染色体基因破坏和插入方法。该过程包括消除野生型细菌基因并在野生型基因的原始基因座处引入突变等位基因或其他插入。为了证明这种方法的实用性，大肠杆菌的tig基因被替换的同源重组与含有氯霉素抗性基因和sacB基因的盒。然后取出盒，将tig突变等位基因移至天然tig位置。测序和Western blotting结果表明，插入或缺失可以精确地导入E。大肠杆菌中的蛋白质。我们的系统不需要额外的体外操作，例如限制性消化或连接，并且不需要使用用于防止由模板质粒转化引起的假阳性转化体的特定质粒或菌株。该技术可广泛应用于细菌基因组分析。
A simple and general method for disrupting chromosomal genes and introducing insertions is described. This procedure involves eliminating wild-type bacterial genes and introducing mutant alleles or other insertions at the original locus of the wild-type gene. To demonstrate the utility of this approach, the tig gene of Escherichia coli was replaced by homologous recombination with a cassette containing the chloramphenicol resistance gene and the sacB gene. The cassette was then removed and the tig mutant alleles were moved into the native tig location. Sequencing and Western blotting results demonstrated that insertions or deletions can be introduced precisely in E. coli using our approach. Our system does not require extra in vitro manipulations such as restriction digestion or ligation, and does not require use of specific plasmids or strains which are used to prevent false positive transformants caused by template plasmid transformation. This technique can be used widely in bacterial genome analysis.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1016/j.bbapap.2009.03.008
发表时间：
2009-06
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Dong-Jie Fan;Yan-Wei Ding;Jun‐mei Zhou
通讯作者：
Dong-Jie Fan;Yan-Wei Ding;Jun‐mei Zhou
影响因子：
14.9
作者：
Muyrers, JPP;Zhang, YM;Stewart, AF
通讯作者：
Stewart, AF
影响因子：
3.5
作者：
Ellermeier, CD;Janakiraman, A;Slauch, JM
通讯作者：
Slauch, JM
影响因子：
4.8
作者：
Merz, Frieder;Hoffmann, Anja;Deuerling, Elke
通讯作者：
Deuerling, Elke
大肠杆菌K-12的构造框架，单基因敲除突变体：Keio Collection。
影响因子：
9.9
作者：
通讯作者：
--