Real-time single-molecule imaging reveals a direct interaction between UvrC and UvrB on DNA tightropes.
Real-time single-molecule imaging reveals a direct interaction between UvrC and UvrB on DNA tightropes.
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DOI：
10.1093/nar/gkt177
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发表时间：
2013-05
影响因子：
14.9
通讯作者：
Kad NM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hughes CD;Wang H;Ghodke H;Simons M;Towheed A;Peng Y;Van Houten B;Kad NM
核苷酸切除DNA修复在所有生命王国中是机械保守的。在原核生物中，这种多酶过程需要六种蛋白质：UvrA-D，DNA聚合酶I和DNA连接酶。为了研究UvrC如何将UvrB-DNA切割前复合物定位在损伤部位，我们用不同颜色的量子点标记UvrB和UvrC，并使用斜角荧光成像在各种溶液条件下定量观察它们与DNA tightropes的相互作用。单独，UvrC主要在低盐下与DNA静态相互作用。然而，令人惊讶的是，UvrC和UvrB在溶液中结合在一起，在双链体DNA上形成以前未见过的UvrBC复合物。这种UvrBC复合物是高度能动的，并参与无偏的一维扩散。为了测试UvrB是否与UvrBC-DNA复合物中的DNA直接接触，我们研究了三种UvrB突变体：Y 96 A、β-发夹缺失和D338 N。这些突变体影响了UvrBC复合物的运动特性，表明UvrB与UvrC结合时与DNA密切接触。考虑到我们实验中UvrB的体内过量和UvrBC的丰度，这种新鉴定的复合物可能是细胞中UvrC的主要形式。
Nucleotide excision DNA repair is mechanistically conserved across all kingdoms of life. In prokaryotes, this multi-enzyme process requires six proteins: UvrA–D, DNA polymerase I and DNA ligase. To examine how UvrC locates the UvrB–DNA pre-incision complex at a site of damage, we have labeled UvrB and UvrC with different colored quantum dots and quantitatively observed their interactions with DNA tightropes under a variety of solution conditions using oblique angle fluorescence imaging. Alone, UvrC predominantly interacts statically with DNA at low salt. Surprisingly, however, UvrC and UvrB together in solution bind to form the previously unseen UvrBC complex on duplex DNA. This UvrBC complex is highly motile and engages in unbiased one-dimensional diffusion. To test whether UvrB makes direct contact with the DNA in the UvrBC–DNA complex, we investigated three UvrB mutants: Y96A, a β-hairpin deletion and D338N. These mutants affected the motile properties of the UvrBC complex, indicating that UvrB is in intimate contact with the DNA when bound to UvrC. Given the in vivo excess of UvrB and the abundance of UvrBC in our experiments, this newly identified complex is likely to be the predominant form of UvrC in the cell.
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影响因子：
14.9
作者：
Dunn AR;Kad NM;Nelson SR;Warshaw DM;Wallace SS
通讯作者：
Wallace SS
影响因子：
3.3
作者：
Bagchi, Biman;Blainey, Paul C.;Xie, X. Sunney
通讯作者：
Xie, X. Sunney
DOI：
10.1073/pnas.96.21.11717
发表时间：
1999-10-12
影响因子：
11.1
作者：
Machius, M;Henry, L;Deisenhofer, J
通讯作者：
Deisenhofer, J
DOI：
10.1073/pnas.82.15.4925
发表时间：
1985-01-01
影响因子：
11.1
作者：
CARON, PR;KUSHNER, SR;GROSSMAN, L
通讯作者：
GROSSMAN, L
DOI：
10.1016/b978-0-12-387665-2.00001-8
发表时间：
2012
影响因子：
--
作者：
Kad, Neil M.;Van Houten, Bennett
通讯作者：
Van Houten, Bennett