High-Throughput Electron Cryo-tomography of Protein Complexes and Their Assembly.
High-Throughput Electron Cryo-tomography of Protein Complexes and Their Assembly.
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蛋白质复合物及其组装的高通量电子冷冻断层扫描。
DOI：
10.1007/978-1-4939-7759-8_2
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Henderson LD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Henderson LD
电子冷冻断层扫描和亚断层图像平均化能够以三维方式原位可视化蛋白质复合物，以接近天然的冷冻水合状态达到纳米分辨率。为了实现这一点，将完整的细胞玻璃化并在电子显微镜内在一定范围的倾斜度下成像。这些图像随后可以被重建成样品池的三维体积表示。由于复合物是在原位可视化的，因此对其机制、组装过程以及与其他蛋白质的动态相互作用的关键见解成为可能。为了说明电子冷冻断层扫描的工作流程可视化蛋白质复合物在原位，我们描述了我们的工作流程准备样品，成像和图像处理使用Leginon的数据收集，IMOD的图像重建，和PEET subtomogram平均。
Electron cryo-tomography and subtomogram averaging enable visualization of protein complexes in situ, in three dimensions, in a near-native frozen-hydrated state to nanometer resolutions. To achieve this, intact cells are vitrified and imaged over a range of tilts within an electron microscope. These images can subsequently be reconstructed into a three-dimensional volume representation of the sample cell. Because complexes are visualized in situ, crucial insights into their mechanism, assembly process, and dynamic interactions with other proteins become possible. To illustrate the electron cryo-tomography workflow for visualizing protein complexes in situ, we describe our workflow of preparing samples, imaging, and image processing using Leginon for data collection, IMOD for image reconstruction, and PEET for subtomogram averaging.
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3
作者：
Suloway, Christian;Shi, Jian;Cheng, Anchi;Pulokas, James;Carragher, Bridget;Potter, Clinton S.;Zheng, Shawn Q.;Agard, David A.;Jensen, Grant J.
通讯作者：
Jensen, Grant J.
大肠杆菌生命周期中核分离和细胞分裂的形态学分析
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3.2
作者：
C. Woldringh
通讯作者：
C. Woldringh
影响因子：
3
作者：
Zheng, QXS;Braunfeld, MB;Agard, DA
通讯作者：
Agard, DA
影响因子：
3
作者：
Mastronarde, DN
通讯作者：
Mastronarde, DN
DOI：
10.3791/53608
发表时间：
2016-01-30
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Morado DR;Hu B;Liu J
通讯作者：
Liu J