Cell cycle synchronization of Escherichia coli using the stringent response, with fluorescence labeling assays for DNA content and replication.
Cell cycle synchronization of Escherichia coli using the stringent response, with fluorescence labeling assays for DNA content and replication.
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DOI：
10.1016/j.ymeth.2009.02.010
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发表时间：
2009-05
期刊：
影响因子：
4.8
通讯作者：
Lovett, Susan T.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ferullo, Daniel J.;Cooper, Deani L.;Moore, Hayley R.;Lovett, Susan T.
关键词：
我们描述了一种在细菌E.Coli中同步细胞周期的方法。用氨基酸类似物DL-丝氨酸异羟甲酸酯处理非同步培养物可诱导严格的反应，伴随而来的是DNA复制在起始时的停止。根据DNA含量的流式细胞术、Southern印迹和显微镜检测，在释放严格反应后，细胞同步启动DNA复制。这种方法的优点是可以在完全野生型细胞中使用，在不同的生长速度下，也可以适用于其他严格反应控制复制的细菌物种。我们还阐述了在细菌种群中建立细胞周期参数的其他有用方法。我们描述了使用DNA特定染料PicoGreen的流式细胞术方法来分析细菌种群的DNA含量，这种染料很容易被大多数商用流式细胞仪检测到。我们还提出了一种掺入核苷酸乙炔-脱氧尿苷EDU的方法，然后用荧光染料“点击”标记，这使我们能够在非变性条件下测量和可视化固定的E.ColiK-12细胞中新复制的DNA。
We describe a method for synchronization of the cell cycle in the bacterium E. coli. Treatment of asynchronous cultures with the amino acid analog, DL-serine hydroxamate, induces the stringent response, with concomitant arrest of DNA replication at initiation. Following release of the stringent response, cells initiate DNA replication in synchrony, as determined by flow cytometry for DNA content, Southern blotting and microscopy. This method has the advantage that it can be used in fully wild-type cells, at different growth rates, and may be applicable to other bacterial species with replication control by the stringent response. We also elaborate other methods useful for establishing cell cycle parameters in bacterial populations. We describe flow cytometric methods for analyzing bacterial populations for DNA content using the DNA-specific dye PicoGreen, readily detected by most commercial flow cytometers. We also present an method for incorporation of the nucleotide ethynyl-deoxyuridine, EdU, followed by “click” labeling with fluorescent dyes, which allows us to measure and visualize newly replicated DNA in fixed E. coli K-12 cells under non-denaturing conditions.
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DOI：
10.1007/bf00269647
发表时间：
1970-01-01
期刊：
MOLECULAR AND GENERAL GENETICS
影响因子：
--
作者：
CARL, PL
通讯作者：
CARL, PL
影响因子：
64.5
作者：
Bates, D;Kleckner, N
通讯作者：
Kleckner, N
影响因子：
3.9
作者：
Boye, E;Blinkova, A;Walker, JR
通讯作者：
Walker, JR
影响因子：
56.9
作者：
GRATZNER, HG
通讯作者：
GRATZNER, HG
影响因子：
2.7
作者：
Buck, Suzanne B.;Bradford, Jolene;Salic, Adrian
通讯作者：
Salic, Adrian