Syntaxin 1A interaction with the dopamine transporter promotes amphetamine-induced dopamine efflux.
Syntaxin 1A interaction with the dopamine transporter promotes amphetamine-induced dopamine efflux.
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DOI：
10.1124/mol.108.048447
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发表时间：
2008-10
影响因子：
3.6
通讯作者：
Galli A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Binda F;Dipace C;Bowton E;Robertson SD;Lute BJ;Fog JU;Zhang M;Sen N;Colbran RJ;Gnegy ME;Gether U;Javitch JA;Erreger K;Galli A
SNARE蛋白syntaxin 1A（SYN 1A）与跨膜蛋白（包括离子通道和神经递质转运蛋白）相互作用并调节其功能。在这里，我们定义的前33个氨基酸的N-末端的多巴胺（DA）转运蛋白（DAT）的网站与SYN 1A的直接相互作用。安非他明（AMPH）增加SYN 1A与异源表达系统（hDAT细胞）中的人DAT（hDAT）以及与鼠纹状体突触体中的天然DAT的缔合。DAT从生物素化的馏分的免疫沉淀表明，AMPH诱导的DAT/SYN 1A协会的增加发生在质膜。在DA流出的灌流试验中，过表达SYN 1A的细胞表现出显着更大的AMPH诱导的DA释放相对于对照细胞。将膜片钳技术与电流法相结合，在电压钳下测量DA的释放。在-60 mV（生理静息电位）时，AMPH不会诱导hDAT细胞和DA神经元中的DA流出。相比之下，用全细胞移液管将外源性SYN 1A（3 µM）灌注到细胞中，在hDAT细胞和DA神经元中均能在−60 mV下实现AMPH诱导的DA流出。最近，它已被证明，钙/钙调素依赖性蛋白激酶II（CaMKII）被激活的AMPH和调节AMPH诱导的DA流出。在这里，我们表明，AMPH诱导的DAT和SYN 1A之间的关联需要CaMKII的活性和抑制CaMKII阻断外源性SYN 1A的能力，以促进DA流出。这些数据表明，AMPH激活的CaMKII支持DAT/SYN 1A协会，导致DAT的DA流出的模式。
The SNARE protein syntaxin1A (SYN1A) interacts with and regulates the function of transmembrane proteins including ion channels and neurotransmitter transporters. Here we define the first 33 amino acids of the N-terminus of the dopamine (DA) transporter (DAT) as the site of direct interaction with SYN1A. Amphetamine (AMPH) increases the association of SYN1A with human DAT (hDAT) in a heterologous expression system (hDAT cells) and with native DAT in murine striatal synaptosomes. Immunoprecipitation of DAT from the biotinylated fraction shows that the AMPH-induced increase in DAT/SYN1A association occurs at the plasma membrane. In a superfusion assay of DA efflux, cells overexpressing SYN1A exhibited significantly greater AMPH-induced DA release with respect to control cells. By combining the patch clamp technique with amperometry we measured DA release under voltage clamp. At −60 mV, a physiological resting potential, AMPH did not induce DA efflux in hDAT cells and DA neurons. In contrast, perfusion of exogenous SYN1A (3 µM) into the cell with the whole-cell pipette enabled AMPH-induced DA efflux at −60 mV both in hDAT cells and DA neurons. Recently, it has been shown that Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII) is activated by AMPH and regulates AMPH-induced DA efflux. Here we show that AMPH-induced association between DAT and SYN1A requires CaMKII activity and that inhibition of CaMKII blocks the ability of exogenous SYN1A to promote DA efflux. These data suggest that AMPH activation of CaMKII supports DAT/SYN1A association, resulting in a mode of DAT capable of DA efflux.
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