A flow cytometry-based FRET assay to identify and analyse protein-protein interactions in living cells.
A flow cytometry-based FRET assay to identify and analyse protein-protein interactions in living cells.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0009344
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发表时间：
2010-02-22
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Schindler M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Banning C;Votteler J;Hoffmann D;Koppensteiner H;Warmer M;Reimer R;Kirchhoff F;Schubert U;Hauber J;Schindler M
Försters共振能量转移（FRET）显微镜被广泛用于完整细胞中蛋白质相互作用的分析。然而，FRET显微术在技术上具有挑战性，并且不允许评估大量细胞的相互作用。为了克服这些局限性，我们开发了一种基于流式细胞术的FRET检测，并分析了人类和猿猴免疫缺陷病毒（HIV和SIV）Nef和Vpu蛋白与细胞因子的相互作用，以及HIV Rev多聚体的形成。除其他外，我们的特点与CD 317（也称为BST-2或拴系蛋白），宿主限制因子，抑制HIV从感染细胞释放的Vpu的相互作用，并证明两者的直接结合是由Vpu跨膜区介导的。此外，我们调整了我们的测定，以允许以高通量形式鉴定新的蛋白质相互作用伴侣。所提出的FRET和FACS的组合提供了宝贵的可能性，发现和定义活细胞中的蛋白质相互作用，并预计将有助于识别用于治疗人类疾病的新的治疗靶点。
Försters resonance energy transfer (FRET) microscopy is widely used for the analysis of protein interactions in intact cells. However, FRET microscopy is technically challenging and does not allow assessing interactions in large cell numbers. To overcome these limitations we developed a flow cytometry-based FRET assay and analysed interactions of human and simian immunodeficiency virus (HIV and SIV) Nef and Vpu proteins with cellular factors, as well as HIV Rev multimer-formation. Amongst others, we characterize the interaction of Vpu with CD317 (also termed Bst-2 or tetherin), a host restriction factor that inhibits HIV release from infected cells and demonstrate that the direct binding of both is mediated by the Vpu membrane-spanning region. Furthermore, we adapted our assay to allow the identification of novel protein interaction partners in a high-throughput format. The presented combination of FRET and FACS offers the precious possibility to discover and define protein interactions in living cells and is expected to contribute to the identification of novel therapeutic targets for treatment of human diseases.
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影响因子：
5.4
作者：
Greenway, AL;McPhee, DA;Lambert, P
通讯作者：
Lambert, P
影响因子：
56.9
作者：
Ng, T;Squire, A;Parker, PJ
通讯作者：
Parker, PJ
影响因子：
16.2
作者：
Moriyoshi, K;Richards, LJ;Nakanishi, S
通讯作者：
Nakanishi, S
DOI：
10.2174/1568008043339695
发表时间：
2004-12-01
期刊：
Current Drug Targets - Immune Endocrine and Metabolic Disorders
影响因子：
--
作者：
Binette, Julie;Cohen, Eric A.
通讯作者：
Cohen, Eric A.
影响因子：
64.5
作者：
Schindler, Michael;Muench, Jan;Kirchhoff, Frank
通讯作者：
Kirchhoff, Frank