Methods to identify enzymes that degrade the main extracellular polysaccharide component of Staphylococcus epidermidis biofilms.
Methods to identify enzymes that degrade the main extracellular polysaccharide component of Staphylococcus epidermidis biofilms.
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DOI：
10.4161/viru.23560
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发表时间：
2013-04-01
期刊：
影响因子：
5.2
通讯作者：
Wiesner J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gökçen A;Vilcinskas A;Wiesner J
表皮葡萄球菌产生的胞外聚-β-1，6-N-乙酰-D-葡萄糖胺（PNAG）是留置医疗器械上生物膜形成的主要决定因素。因此，降解PNAG的酶为生物膜去除和抗生物膜涂层的制造提供了有吸引力的策略。在这里，我们提出的方法，允许鉴定的PNAG降解酶的能力，分离生物膜。我们的方案包括从S.表皮细胞培养物，可溶性PNAG与候选酶的孵育，以及使用高pH阴离子交换色谱法（HPAEC）检测N-乙酰基-d-葡糖胺释放的测定，随后并行脉冲安培检测（PAD）和在线电喷雾电离质谱（ESI-MS）。我们使用分散素B验证了我们的方法，分散素B是目前唯一已知的PNAG降解酶。
The production of extracellular poly-β-1,6-N-acetyl-d-glucosamine (PNAG) by Staphylococcus epidermidis is the principal determinant of biofilm formation on indwelling medical devices. Enzymes that degrade PNAG therefore provide an attractive strategy for biofilm removal and for the manufacture of biofilm-resistant coatings. Here we present methods that allow the identification of PNAG-degrading enzymes with the ability to detach biofilms. Our protocol includes the preparation of soluble PNAG from S. epidermidis cultures, the incubation of soluble PNAG with candidate enzymes and assays that detect the release of N-acetyl-d-glucosamine using high-pH anion-exchange chromatography (HPAEC) followed in parallel by pulsed amperometric detection (PAD) and online electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). We validated our procedures using dispersin B, which is currently the only known PNAG-degrading enzyme.
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影响因子：
--
作者：
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Ramasubbu N
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作者：
Rosenthal, Victor D.;Hu Bijie;Jayatilleke, Kushlani
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Jayatilleke, Kushlani
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