Tetrazine-Ligated CRISPR sgRNAs for Efficient Genome Editing.
Tetrazine-Ligated CRISPR sgRNAs for Efficient Genome Editing.
复制标题
DOI：
10.1021/acschembio.2c00116
复制
发表时间：
2022-05-20
影响因子：
4
通讯作者：
Watts, Jonathan K.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen, Zexiang;Devi, Gitali;Arif, Amena;Zamore, Phillip D.;Sontheimer, Erik J.;Watts, Jonathan K.
CRISPR-Cas技术已经彻底改变了基因组编辑。它在生物医学研究和治疗中的广泛和快速的应用导致了对引导rna的需求增加。化学修饰的单导rna （sgRNAs）的合成仍然是一个瓶颈。在这里，我们报道了一种用于制备sgrna的四嗪连接方法的发展。在温和的条件下，crRNA 3 ‘端上的四氮基团和tracrRNA 5 ’端上的降冰片烯基团使crRNA和tracrRNA之间成功连接形成sgRNA。四嗪连接的sgRNAs允许对人类细胞中的报告基因和内源性基因座进行有效的基因组编辑。高效编辑要求对连杆进行结构优化。
CRISPR-Cas technology has revolutionized genome editing. Its broad and fast-growing application in biomedical research and therapeutics has led to increased demand for guide RNAs. The synthesis of chemically modified single-guide RNAs (sgRNAs) containing >100 nucleotides remains a bottleneck. Here we report the development of a tetrazine ligation method for the preparation of sgRNAs. A tetrazine moiety on the 3′-end of the crRNA and a norbornene moiety on the 5′-end of the tracrRNA enable successful ligation between crRNA and tracrRNA to form sgRNA under mild conditions. Tetrazine-ligated sgRNAs allow efficient genome editing of reporter and endogenous loci in human cells. High-efficiency editing requires structural optimization of the linker.
登录
查看更多内容
影响因子：
46.2
作者：
Jewett JC;Bertozzi CR
通讯作者：
Bertozzi CR
影响因子：
15
作者：
Blackman, Melissa L.;Royzen, Maksim;Fox, Joseph M.
通讯作者：
Fox, Joseph M.
影响因子：
16.6
作者：
Cromwell CR;Sung K;Park J;Krysler AR;Jovel J;Kim SK;Hubbard BP
通讯作者：
Hubbard BP
影响因子：
16.6
作者：
Devaraj, Neal K.;Upadhyay, Rabi;Hatin, Jered B.;Hilderbrand, Scott A.;Weissleder, Ralph
通讯作者：
Weissleder, Ralph
影响因子：
46.9
作者：
Hendel A;Bak RO;Clark JT;Kennedy AB;Ryan DE;Roy S;Steinfeld I;Lunstad BD;Kaiser RJ;Wilkens AB;Bacchetta R;Tsalenko A;Dellinger D;Bruhn L;Porteus MH
通讯作者：
Porteus MH