Multiplexed activation in mammalian cells using a split-intein CRISPR/Cas12a based synthetic transcription factor.
Multiplexed activation in mammalian cells using a split-intein CRISPR/Cas12a based synthetic transcription factor.
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DOI：
10.1093/nar/gkab1191
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发表时间：
2022-01-11
影响因子：
14.9
通讯作者：
Rosser SJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bryson JW;Auxillos JY;Rosser SJ
采用 CRISPR 系统生成合成转录因子大大简化了上调内源基因表达的过程，在细胞生物学、生物生产和细胞重编程中具有大量应用。最近发现的 CRISPR/Cas12a (Cas12a) 系统提供了更大的潜力，因为 Cas12a 能够处理自己的 crRNA 阵列，为单个转录本的后续靶向提供多个单独的 crRNA。在这里，我们展示了 dFnCas12a-VPR 在哺乳动物细胞中的应用，其中新杀弗朗西斯菌 Cas12a (FnCas12a) 拥有比氨基酸球菌属更短的 PAM 序列。 (As) 或毛螺菌科细菌 (Lb) 变体，能够更密集地靶向基因组位点，同时表现与其他变体一样好甚至更好。我们观察到使用 crRNA 阵列可以实现协同激活和多重化，但也表明向 6-crRNA 阵列 5' 表达的 crRNA 显示出活性增强的证据。这不仅代表了一种更灵活的转录调节工具，而且进一步扩展了我们在考虑使用更长的 crRNA 阵列进行多重靶向时的设计能力和局限性的理解。
The adoption of CRISPR systems for the generation of synthetic transcription factors has greatly simplified the process for upregulating endogenous gene expression, with a plethora of applications in cell biology, bioproduction and cell reprogramming. The recently discovered CRISPR/Cas12a (Cas12a) systems offer extended potential, as Cas12a is capable of processing its own crRNA array, to provide multiple individual crRNAs for subsequent targeting from a single transcript. Here we show the application of dFnCas12a-VPR in mammalian cells, with the Francisella novicida Cas12a (FnCas12a) possessing a shorter PAM sequence than Acidaminococcus sp. (As) or Lachnospiraceae bacterium (Lb) variants, enabling denser targeting of genomic loci, while performing just as well or even better than the other variants. We observe that synergistic activation and multiplexing can be achieved using crRNA arrays but also show that crRNAs expressed towards the 5′ of 6-crRNA arrays show evidence of enhanced activity. This not only represents a more flexible tool for transcriptional modulation but further expands our understanding of the design capabilities and limitations when considering longer crRNA arrays for multiplexed targeting.
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影响因子：
64.8
作者：
Anders, Carolin;Niewoehner, Ole;Duerst, Alessia;Jinek, Martin
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Jinek, Martin
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作者：
Zetsche B;Gootenberg JS;Abudayyeh OO;Slaymaker IM;Makarova KS;Essletzbichler P;Volz SE;Joung J;van der Oost J;Regev A;Koonin EV;Zhang F
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Zhang F
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Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
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Tak YE;Kleinstiver BP;Nuñez JK;Hsu JY;Horng JE;Gong J;Weissman JS;Joung JK
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Zetsche B;Heidenreich M;Mohanraju P;Fedorova I;Kneppers J;DeGennaro EM;Winblad N;Choudhury SR;Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Wu WY;Scott DA;Severinov K;van der Oost J;Zhang F
通讯作者：
Zhang F